(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210677090.2 (22)申请日 2022.06.16 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114752540 A (43)申请公布日 2022.07.15 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.23761 2021.1 1.08 (73)专利权人 佛山科学技术学院 地址 528200 广东省佛山市南海区狮山 镇 广云路33号 (72)发明人 黄桂东　陈梓琦　任红　钟先锋　 黄芷珊　金钰莹　陈孟鑫　范文静　 卢怀裕　(74)专利代理 机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权 代理有限公司 2321 1 专利代理师 赵巧娜 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12G 3/02(2019.01) C12R 1/07(2006.01) (56)对比文件 CN 112725218 A,2021.04.3 0 CN 113832083 A,2021.12.24 WO 2022042121 A1,202 2.03.03 审查员 于淼 (54)发明名称 一株耐乙醇的贝莱斯芽孢杆菌Huang及其应 用 (57)摘要 本发明公开了一株耐乙醇的贝莱斯芽孢杆 菌Huang及其应用， 属于微生物发酵领域。 本发明 所述耐乙醇贝莱斯芽孢杆菌Huang为发明人自主 分离， 已于2021年11月8日在中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心保藏， 保藏号为 CGMCC NO.23761。 本发明公布的贝莱斯芽孢杆菌 筛选自高度发酵酒， 其营养体能够在0% ‑8%乙醇 下生长， 在无水乙醇下存活2  h不形成芽孢， 具有 较高的乙醇耐受能力。 本发明所述的耐乙醇贝莱 斯芽孢杆菌， 液态发酵中能够产生丰富的酸类、 氨基酸物质， 有效提高发酵酒的风味及品质， 在 酿酒领域具有一定的应用价 值。 权利要求书1页 说明书10页 序列表2页 附图5页 CN 114752540 B 2022.09.06 CN 114752540 B 1.一株耐乙醇的贝莱斯芽孢杆菌 （ Bacillus  velezensis ） ， 其特征在于， 所述贝莱斯芽 孢杆菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC   NO.23761， 保藏日期为2021年1 1月08日。 2.一种微生物菌剂， 其特征在于， 所述微生物菌剂中含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢 杆菌， 或含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的发酵液， 或含有权利要求1所述的贝莱斯 芽孢杆菌的冻干粉。 3.如权利要求2所述的微生物菌剂， 其特征在于， 所述微生物菌剂中， 所述贝莱斯芽孢 杆菌的含量 不少于： 1 ×105 CFU/mL。 4.一种产品， 其特征在于， 所述产品中含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要 求2或3所述的微 生物菌剂。 5.如权利要求4所述的产品， 其特征在于， 所述产品中， 所述贝莱斯芽孢杆菌的含量不 少于： 1×105 CFU/mL。 6.如权利要求 4或5所述的产品， 其特 征在于， 所述产品为 化学品。 7.如权利要求6所述的产品， 其特征在于， 所述化学品包括但不 限于窖泥强化剂、 饲料 添加剂、 大曲强化剂。 8.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要求2或3所述的微生物菌剂在强化窖泥或 酿酒中的应用。 9.一种功能性强化菌剂的制备方法， 其特征在于， 所述方法为向制曲的原料中添加权 利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或权利要求2或3所述的微 生物菌剂， 发酵制备 得到。 10.一种生产白酒的方法， 其特征在于， 在白酒发酵过程中添加权利要求1所述的贝莱 斯芽孢杆菌， 或权利要求2或3所述的微 生物菌剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114752540 B 2一株耐乙醇的贝莱斯芽孢杆菌Hu ang及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及一株耐乙醇的贝莱斯芽孢杆菌 Huang及其应用， 属于微 生物发酵 领域。 背景技术 [0002]芽孢杆菌是发酵酒制作过程中具有较高丰度的功能微生物， 对发酵酒的风味品质 具有重要贡献， 其种类和数量影响发酵进程和酒的风味特征。 芽孢杆菌还具有多种降解酶 的分泌能力， 能够分解淀粉、 蛋白质等大分子物质， 生成有机酸、 氨基酸等小分子物质， 提高 原料的利用率。 此外， 芽孢杆菌还能形成双乙酰、 含氮化合物等芳香物质， 同时为其他风味 化合物的形成提供前驱底物， 对发酵酒风味的赋予和调控起到重要作用， 是多种香型酒特 征风味形成的关键微生物。 芽孢杆菌的存活形式分为营养体和芽孢， 营养体能正常生长繁 殖及代谢， 但耐受性差， 储藏期短， 易死亡； 而芽孢代谢不活跃， 结构高度有序， 对多种胁迫 环境具有较强的抵抗能力， 同时仍保持潜在的萌发力。 目前关于芽孢杆菌的文献报道最高 能耐受12  %乙醇浓度 （如解淀粉芽孢杆菌） ， 而现有专利中报道 （公开号为CN112251379B的 中国发明专利） 贝莱斯芽孢杆菌能够耐受5%乙醇浓度。 [0003]在酿酒过程中， 逐渐积累的乙醇会抑制芽孢杆菌 的生长和代谢， 高浓度的乙醇会 导致芽孢杆菌形成几乎无代谢活性的芽孢休眠体， 进而影响其发挥功效。 因此， 筛选能够耐 受高浓度乙醇的芽孢杆菌营养体对提高发酵酒产品 品质尤为重要。 发明内容 [0004]本发明从发酵酒样中筛选出芽孢杆菌， 经16S  rRNA及特异性管家基因 gyrB对比分 析， 鉴定为贝莱斯芽孢杆菌。 该菌株能够分泌蛋白酶及 纤维素酶， 其代谢产物分析表明， 该 菌株生长代谢过程中产生大量的氨基酸及其衍生物， 有机酸以及核苷酸及衍生物， 对发酵 酒风味的赋予和营养物质的调控中起到重要作用。 对该菌株进行乙醇耐受实验， 发现其营 养体能在0%~8%乙醇条件 下生长， 且能在无水乙醇中存活。 这表明菌株在发酵酒的酿造过程 中具有一定的耐受乙醇能力， 进 而能够发挥其有益作用。 [0005]本发明提供了一株贝莱斯芽孢杆菌 （ Bacillus  velezensis ） Huang， 所述贝莱斯芽 孢杆菌Huang保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为CGMCC   NO.23761， 保藏日期为2021年1 1月08日。 [0006]所述贝莱斯芽孢杆菌Huang取自酒厂发酵酒样， 对菌株进行生理生化试验， 16S   rRNA分子生物学鉴定并辅以特异性引物 gyrB进行辅助鉴定， 并以特异性引物 kdgK进行验 证， 以鉴定菌株的种属及分类， 其16S  rRNA序列具有如SEQ  ID NO： 1所示的核苷酸序列。 所 述耐乙醇贝莱斯芽孢杆菌的 gyrB序列具有如SEQ  ID NO： 2所示的核苷 酸序列。 经鉴定， 证明 本发明的菌株为贝莱斯芽孢杆菌 （ Bacillus  velezensis ） ， 将其命名为贝莱斯芽孢杆菌 Huang。 [0007]所述贝莱斯芽孢杆菌Huang菌株形态学特征是： 菌株菌体在 显微镜下呈杆状， 单个 或成对排列， 菌落呈乳白不透明圆状。说　明　书 1/10 页 3 CN 114752540 B 3