(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210609343.2 (22)申请日 2022.05.31 (83)生物保 藏信息 GDMCC NO.62347 202 2.04.01 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510642 广东省广州市天河区五山路 483号 (72)发明人 沈宏　卢波斯　沈丁熠　 (74)专利代理 机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 专利代理师 陈娟 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 9/54(2006.01) C12P 21/06(2006.01)C12P 13/06(2006.01) C12P 13/10(2006.01) C12P 13/08(2006.01) C12P 13/12(2006.01) C12P 13/14(2006.01) C12P 13/22(2006.01) C12P 13/04(2006.01) C12P 13/20(2006.01) C12P 13/24(2006.01) C05F 17/20(2020.01) C12R 1/085(2006.01) (54)发明名称 一株耐热且高产蛋白酶的蜡状芽孢杆菌SH- 831及其应用 (57)摘要 本发明涉及一株耐热且高产蛋白酶的蜡状 芽孢杆菌(Bacillus  cereus)SH ‑831及其应用。 该菌株已经于2022年4月1日保藏于广东省微生 物菌种保藏中心， 保藏地址为广东省广州市越秀 区先烈中路100号大院59号楼5楼， 保藏编号： GDMCC NO .62347。 本发明提供产蛋白酶的 (Bacillus  cereus)SH ‑831菌株， 该菌株能分泌 高活性蛋白酶NpSH831， 其最大 酶活性为87 1.2U/ mL。 该菌株在55℃下能正常生长， 可 发酵花生麸、 脱脂大豆粉和鱼粉， 制备蛋白水解物， 具有广泛 的应用前 景。 权利要求书2页 说明书14页 序列表1页 附图6页 CN 115058355 A 2022.09.16 CN 115058355 A 1.一株耐热且高产蛋白酶的蜡状芽孢杆菌(Bacillus  cereus)SH ‑831， 其特征在于， 所 述菌株于2022 年4月1日保藏于广东省微生物菌种保藏中心， 保藏地址为广东省广州市越秀 区先烈中路10 0号大院59号楼5楼， 保藏 号为GDMCCNO.62347。 2.根据权利要求1所述蜡状芽孢杆菌SH ‑831， 其特征在于， 所述菌株的16SrDNA如SEQ   ID NO.1所示。 3.权利要求1～ 2任一所述 蜡状芽孢杆菌SH ‑831在制备蛋白酶中的应用。 4.一种制备蛋白酶的方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 将权利要求1～2任一所述蜡状 芽孢杆菌SH ‑831接种于培养基中培养， 离心， 取上清液， 即得含蛋白酶的粗酶液， 其最高活 性为871.2U/mL； 所述培养基由如下质量浓度的组分组成： 脱脂奶粉5～10g/L， 氯化钠1～4g/L， 磷酸氢 二钾0.1～1g/L。 5.根据权利要求4所述方法， 其特征在于， 所述培养基的pH为5～7； 所述蜡状芽孢杆菌 SH‑831的接种量为0.1％～1％； 所述培养的温度为28～55℃， 时间为8～15h； 所述培养为摇 床培养， 转速为15 0～200r/min。 6.权利要求1～2任一所述蜡状芽孢杆菌SH ‑831在制备花生麸提取液、 鱼蛋白提取液或 大豆提取 液中的应用。 7.一种制备花 生麸提取 液的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： S11： 将权利要求1～2任一所述蜡状芽孢杆菌SH ‑831接种于培养基中培养， 得到SH ‑831 菌液， 备用； 所述培养基由如下质量浓度的组分组成： 脱脂奶粉5～10g/L， 氯化钠1～4g/L， 磷酸氢 二钾0.1～1g/L； 所述培 养基的pH为5～7； S12： 将花 生麸粉剂分散 于水中得花 生麸悬浊液； S13： 调节花生麸悬浊液的pH为9.0～ 11.0， 然后加入碱性蛋白酶降解， 得到酶解花生麸 产物； S14： 将S13酶解花生麸产物的pH调整为6.5～7.5， 加入S11所得SH ‑831菌液、 氯化钠和 磷酸氢二钾， 发酵， 离心， 即得 所述花生麸提取 液， 产率可达47.8％。 8.根据权利要求7所述方法， 其特征在于， S12中所述花生麸悬浊液的质量分数为10～ 15％； S13中所述碱性蛋白酶的添加量为0.01～0.05％； 所述反应条件为120～180r/min， 35 ‑ 50℃条件下反应6～10 h； S14中所述SH ‑831菌液与花生麸悬浊液的质量比为0.005～0.01:1； 所述氯化钠的添加 量为1～4g/L； 所述磷酸氢二钾的添加量为0.1～1 g/L； 所述发酵的温度为26～35℃， 时间为 3～5d。 9.一种制备鱼蛋白提取 液的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： S21： 将权利要求1～2任一所述蜡状芽孢杆菌SH ‑831接种于培养基中培养， 得到SH ‑831 菌液， 备用； 所述培养基由如下质量浓度的组分组成： 脱脂奶粉5～10g/L， 氯化钠1～4g/L， 磷酸氢 二钾0.1～1g/L； 所述培 养基的pH为5～7； S22： 将鱼粉剂分散 于水中得鱼粉悬 浊液；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115058355 A 2S23： 向鱼粉悬浊液中加入S21制得的SH ‑831菌液、 氯化钠和磷酸氢二钾， 发酵， 离心， 即 得所述鱼蛋白提取 液。 S24中所述SH ‑831菌液与鱼粉的质量比为0.005～0.01:1； 所述氯化钠的添加量为1～ 4g/L； 所述磷酸氢二钾的添加量 为0.1～1g/L； 所述发酵的温度为26～3 5℃， 时间为3～5d。 10.一种制备 大豆提取 液的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： S31： 将权利要求1～2任一所述蜡状芽孢杆菌SH ‑831接种于培养基中培养， 得到SH ‑831 菌液， 备用； 所述培养基由如下质量浓度的组分组成： 脱脂奶粉5～10g/L， 氯化钠1～4g/L， 磷酸氢 二钾0.1～1g/L； 所述培 养基的pH为5～7； S32： 将脱脂大豆粉剂分散 于水中得 大豆悬浊液； S33： 向大豆悬浊液中加入S31所制得的SH ‑831菌液、 氯化钠和磷酸氢二钾， 发酵， 离心， 即得所述鱼蛋白提取 液。 S34中所述SH ‑831菌液与脱脂大豆粉的质量比为0.005～0.01:1； 所述氯化钠的添加量 为1～4g/L； 所述磷酸氢二钾的添加量为0.1～1g/L； 所述发酵的温度为26～35℃， 时间为3 ～5d。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115058355 A 3