(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210608388.8 (22)申请日 2022.05.31 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.24446 2022.02.28 (71)申请人 青岛蔚蓝赛德生物科技有限公司 地址 266100 山东省青岛市崂山区九水东 路596-1号 (72)发明人 赵琬玫　刘圣鹏　 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C12R 1/38(2006.01) C02F 101/32(2006.01) C02F 101/16(2006.01) (54)发明名称 一株脱氮假单胞菌及其在污废水净化领域 的应用 (57)摘要 本 发 明 涉 及 一 株 脱 氮 假 单 胞 菌 (Pseudomonas  denitrificans)XA ‑1， 保藏于中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 地址为： 北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科 学 院 微 生 物 研 究 所 ，保 藏 编 号 为 ： CGMCCNo.24446， 该菌株对于苯系物的降解效率 高， 在30℃条件下， 针对评价培养基中50mg/L以 下的苯含量， 72 h的苯降解率达到96％以上； 且中 度耐盐， 在5％以下的盐度条件下生长时， 活菌数 几乎不受影响。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图1页 CN 114908016 A 2022.08.16 CN 114908016 A 1.一株脱氮假单胞菌(Pseudomonas  denitrificans)， 其特征在于， 保藏于中国微生物 菌种保藏管理委员会 普通微生物中心， 保藏编号 为： CGMCC No.24446。 2.一种微 生物菌剂， 其特 征在于， 有效成分包 含权利要求1所述的脱氮假单 胞菌。 3.权利要求1所述脱氮假单 胞菌的发酵 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)一级种子培养： 无菌条件下， 取脱氮假单胞菌接种于液体LB培养基中， 于25 ‑35℃、 150‑300rpm的条件下培 养12‑48h， 得到脱氮假单 胞菌的一级种子 培养液； (2)二级种子培养： 无菌条件下， 将脱氮假单胞菌的一级种子培养液按照1 ‑10vol％的 接种量接种于液体LB培养基中， 于25 ‑35℃、 150 ‑300rpm的条件下培养12 ‑48h， 得到脱氮假 单胞菌的二级种子 培养液； (3)发酵： 待发酵罐内的发酵培养基消毒完毕后， 将步骤(2)所得的脱氮假单胞菌的二 级种子培养液按照5 ‑10vol％的接种量接种于发酵培养基中， 控制温度为25 ‑35℃、 转速 150‑300rpm， 在通气比为1:(1 ‑2)的条件下发酵， 待溶氧开始上升 时停止发酵， 得到脱氮假 单胞菌的发酵 液。 4.根据权利 要求3所述的发酵方法， 其特征在于， 所述发酵培养基组成为： 碳源10 ‑30g/ L、 氮源20 ‑40g/L、 PO43‑0.8‑1.5g/L、 K+0.5‑1.0g/L、 Mg2+0.05‑0.2g/L、 Na+0.1‑0.3g/L、 Mn2+ 0.03‑0.1g/L， 溶剂为水， pH＝6～8。 5.根据权利要求4所述的发酵方法， 其特征在于， 所述碳源选自葡萄糖、 蔗糖、 淀粉、 醋 酸钠或柠檬酸钠中的一种或多种； 所述氮源选自酵母 浸粉、 蛋白胨、 玉米浆干粉、 硫酸铵或硝酸钾中的一种或多种。 6.一种净化污废水的方法， 其特征在于， 包括向污废水中施加权利要求1所述脱氮假单 胞菌的活化液或权利要求2所述 微生物菌剂的步骤。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述污废水中的苯系物浓度为50mg/L以 下， 优选30mg/L以下。 8.根据权利要求6或7所述的方法， 其特征在于， 所述污废水的盐度为5％以下， 优选3％ 以下， 最优选2％以下。 9.根据权利要求6、 7、 8中任一项所述的方法， 其特征在于， 所述脱氮假单胞菌的活化液 或微生物菌剂的接种量 为1000ppm以上， 优选10 00‑20000ppm， 最优选10 00‑10000ppm。 10.权利要求1所述的脱氮假单胞菌和权利要求2所述的微生物菌剂在污废水的净化领 域的应用； 优选的， 所述脱氮假单胞菌和微生物菌剂用于降解污废水中的苯系物； 更优选 的， 所述脱氮假单 胞菌和微 生物菌剂用于降解污废水中的苯。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114908016 A 2一株脱氮假单胞菌及其在污废水净化领域 的应用 技术领域 [0001]本发明涉及一株脱氮假单胞菌及其在污废水的净化过程中降解苯和氨氮以及降 低COD方面的应用， 属于环境 微生物技术领域。 背景技术 [0002]苯是典型的芳香烃化合物之一， 属于难降解的有机污染物， 具有致癌作用， 对人体 及微生物的毒害作用较大。 苯污染主要来 自于农药、 石化、 印染、 制药、 塑料橡胶等行业， 如 果不能对其进行妥善处置， 会 对人类健康、 经济发展及环境的可持续发展造成恶劣影响。 [0003]含苯的工业废水主要有焦化废水、 炼油废水、 印染废水、 ABS 树脂生产废水等， 大量 研究表明， 多 数的含苯工业废水成分 复杂， 且常伴随着氨氮 等无机元素的超标现象， 因此以 苯为碳源的异养硝化 ‑好氧反硝化降解菌株对新型水 处理技术的研究具有重要的理论指导 及实际应用意 义。 [0004]当前， 苯作为废水中的一种急需被处理的物质， 处理方法主要分为物理法、 化学法 和生物法。 其中生物处理技术具有二次污染小、 去除效率高且污染物去除彻底、 经济性能高 等多个优点， 因而成为现代废水处 理技术的研究热点， 受到越来越多的关注。 [0005]目前， 科学家们已经筛选出多种具有苯降解功能的菌株， 如假单胞菌属 (Pseudomonas  sp.)、 黄杆菌属(Flavobacterium  sp.)、 富养产碱菌属(Alcaligenes   eutrophus  sp.)和红球菌属(Rhodococcus  sp.)等， 但这些菌株对于苯的降解效果仍不够 突出， 因而需要筛 选或构建出对苯的降解效果更为 突出的菌株。 发明内容 [0006]本发明针对现有的苯系物降解菌株效果不够突出的现状， 提供一株脱氮假单胞菌 及其在污废水 的净化领域的应用， 该菌株能够利用苯系物作为碳源降解水体中的氨氮， 进 而起到在高效降解水体中苯系物的同时降低氨 氮和COD含量的效果。 [0007]一株脱氮假单胞菌(Pseudomonas  denitrificans)XA ‑1， 保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心， 地址为： 北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微 生物研究所， 保藏编号为： CGMCC  No.24446， 保藏日期为： 2022年2月28日， 其16S  rDNA序列 如SEQ ID No:1所示， 在没有 特别说明的情况下， 本发 明中所述的脱氮 假单胞菌均是指脱氮 假单胞菌XA‑1菌株。 [0008]假单胞菌实现异养硝化 ‑好氧反硝化反应 的机理较为复杂， 目前还未有较为权威 的解释机理， 目前比较流行的理论主要是Robertson等提出的HN ‑AD作用的反应机理 (Thiosphaera  pantotropha)， 在 氮代谢的过程中电子能够被反硝化酶系及氧气所接收， 使 得好氧条件下的反硝化能够实现， 异养硝化、 好氧反硝化的结合点为亚硝酸盐氮， 其主要途 径为： 氨氮→羟胺→亚硝态氮→硝态氮→亚硝态氮→一氧化氮 →一氧化二氮→氮气。 [0009]在好氧条件下以苯为唯一的碳源和能源， 通过细胞的被动或主动转运进入细胞。 所有芳烃在发生环 开裂之前， 必须转变成邻位 或者对位的二羟基苯。 邻苯二酚(儿茶酚)、 3,说　明　书 1/8 页 3 CN 114908016 A 3