(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210830139.3 (22)申请日 2022.07.15 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M2019 960 2019.1 1.20 (71)申请人 有研资源环境 技术研究院 （北京） 有 限公司 地址 101407 北京市怀柔区雁栖经济开发 区兴科东大街1 1号 (72)发明人 闫潇　刘兴宇　高博文　张明江　 王建雷　 (74)专利代理 机构 北京北新智诚知识产权代理 有限公司 1 1100 专利代理师 张晶 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)C12N 1/02(2006.01) B09C 1/10(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C09K 17/14(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C02F 101/20(2006.01) (54)发明名称 一株解磷菌及其固化U(VI)的方法 (57)摘要 本发明提供一株解磷菌， 菌种名称： 泛菌属 (Pantoea sp.)GRINML12， 保藏单位为： 中国典型 培养物保藏中心， 地址： 中国武汉武汉大学， 保藏 日期为： 2019年11月20日， 保藏编号为： CCTCC   NO： M2019960， 利用该菌溶解难溶性的无机磷源 为游离态的磷酸盐， 铀污染体系中的U(VI)与游 离态磷酸盐发生共沉淀反应生成稳定的磷酸铀 酰盐矿物(HUO2PO4， Ca(UO2)2(PO4)2)等)。 通过该 矿化作用可有效固化高毒性、 易迁移、 强生物可 利用以及具有性放射性的U(VI)， 从而实现铀污 染的治理。 权利要求书1页 说明书7页 附图7页 CN 115181701 A 2022.10.14 CN 115181701 A 1.一株解磷菌， 其特征在于， 该菌分类名称为： 泛菌属(Pantoea  sp.)GRINML12， 保藏单 位为： 中国典型培养物保藏中心， 地址： 中国武汉武汉大学， 保藏日期为： 2019年11月20 日， 保藏编号 为： CCTCC NO： M2019 960。 2.用于筛选如权利要求1所述解磷菌的筛选培养基， 其特征在于， 该筛选培养基的配方 为： 葡萄糖5g/L， NaCl  1g/L， MgSO4 1.5g/L， (NH4)2SO4 1.5g/L， MgCl2 0.5g/L； 配制时按顺序 添加上述成分， 并且在每一 成分完全溶解后再添加下一成分， 待 上述添加成分全部溶解后， 添加磷酸三钙1g/L摇匀， 然后添加琼脂粉20g/L混匀后用蒸馏水补足， 并调pH至6.0， 高温灭 菌121℃， 3 0min。 3.用于解磷培养如权利要求1所述解磷菌的解磷培养基， 其特征在于， 该解磷培养基配 方为葡萄糖10g/L， NaCl  2g/L， (NH4)2SO4 1.5g/L， M gCl2 6g/L， KCl  3.5g/L， 配制时按顺序 添加上述成分， 并且在每一 成分完全溶解后再添加下一成分， 上述成分完全溶解后， 添加磷 酸三钙5g/L并摇匀， 然后用蒸馏水补足， 并调pH 至6.0， 高温灭菌121℃， 3 0min。 4.一种解磷菌固化U(VI)的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 1)将如权利要求1所述的解磷菌接种到LB培养基中进行好氧富集培养， 待解磷菌生长 至对数生长期且OD600值达到0.5， 制成解磷菌种子 菌液备用； 2)将步骤1)的该解磷菌种子菌液加入到如权利要求3所述的解磷菌的解磷培养基中， 培养72小时， 制成解磷菌 菌液； 3)从铀污染土壤下游集水池中收集含U(VI)渗滤液， 接种步骤2)制成的解磷菌菌液， 形 成解磷菌固化 渗滤液中U(VI)的体系， 反应周期设置72小时。 5.如权利 要求4所述的解磷菌固化U(VI)的方法， 其特征在于， 步骤1)中所述解磷菌、 步 骤2)中所述 解磷菌种子 菌液和步骤3)中所述 解磷菌菌液的接种量均按体积比为1 ‑10％。 6.如权利 要求4所述的解磷菌固化U(VI)的方法， 其特征在于， 步骤1)中培养解磷菌， 步 骤2)制备解磷菌种子 菌液和步骤3)中制备解磷菌 菌液时的培 养温度均为20 ‑35℃。 7.如权利 要求4所述的解磷菌固化U(VI)的方法， 其特征在于， 步骤1)中所述解磷菌、 步 骤2)中所述解磷菌种子菌液和步骤3)中所述解磷菌菌液的培养条件均为好氧环境， 摇床转 速为120‑180r/min。 8.如权利要求4所述的解磷菌固化U(VI)的方法， 其特征在于， 步骤1)中所述解磷菌的 培养、 步骤2)中所述解磷菌种子菌液的培养和步骤3)中所述解磷菌菌液固化U(VI)的体系 中pH均为5 ‑8。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115181701 A 2一株解磷菌及其固化U(VI)的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及微生物治理重金属污染领域， 特别涉及一株解磷菌及其用于固化U (VI)的方法。 背景技术 [0002]随着全球核能的大力发展， 铀资源的需求日益增加， 铀矿的采、 选、 冶及加工利用 过程中产生大量的含铀废弃物， 据不完全统计， 铀矿开采产生的废石和尾砂量分别约为2.8 ×107t和3×107t。 数量巨大的含铀污染物不合理的堆存和管理造成含铀废水向周边环境扩 散形成铀污染土壤和废水， 同时， 铀污染具有 范围广， 持续时间长， 较为隐蔽等特点， 会对人 类健康和环 境构成长期潜在威胁。 铀在自然界中主要以U(IV)和U(VI)形式存在， 其中U(VI) 较U(IV)具有 更高毒性(化学毒性和辐射毒性)、 易迁移和较强的生物可利用性等特点； 随着 食物链富集到人体， 对人体肝脏、 肾脏和骨骼产生不同程度的伤害， 严重的铀中毒甚至诱 发 多种疾病或导致基因突变、 机体畸变甚至癌变， 对人体的健康造成巨大的威胁。 因此， 对铀 污染的修复关键在于对U(VI)的治理， 通过对环境中U(VI)固化， 对含铀污染场地的治理已 成为环境保护工作所面临的重大问题之一。 [0003]目前， 已报道有多种对铀污染治理的技术， 其中微生物固化被认为是较为理想的 铀污染吸附技术， 但是如何获得具有铀耐受性的可以稳定固化铀污染物的微生物仍然 是亟 待解决的问题。 发明内容 [0004]为了解决上述问题， 本发明的第一个目的在于提供一株解磷菌， 该解磷菌能够在 自身代谢过程中分泌解磷酶， 将难溶性的无机磷源(磷矿粉、 磷酸钙等)溶解为游离态的磷 酸盐。 [0005]本发明的第二个目的在于提供用于 筛选上述解磷菌的筛 选培养基。 [0006]本发明的第三个目的在于提供用于解磷培 养上述解磷菌的解磷培 养基。 [0007]本发明的第四个目的在于提供一种解磷菌固化U(VI)的方法， 该方法利用解磷菌 溶解出的游离态的磷酸盐与U(VI)发生共沉淀反应 生成稳定的磷酸铀酰盐矿物， 如HUO2PO4， Ca(UO2)2(PO4)2)等， 从而降低U(VI)的放射性， 防止U(VI)向周边的继续扩散造成的污染范 围扩大， 以及不被动植物利用。 [0008]为实现上述的目的， 本发明提供一种解磷菌， 该菌分类名称为： 泛菌属(Pantoea   sp.)GRINML12， 保藏单位为： 中 国典型培养物保藏中心， 地址： 中国武汉武汉大学， 保藏日期 为： 2019年1 1月20日， 保藏编号 为： CCTCC NO： M2019 960。 [0009]本发明还提供一种用于筛选上述的解磷菌的筛选培养基， 该筛选培养基的配方 为： 葡萄糖5g/L， NaCl  1g/L， MgSO4 1.5g/L， (NH4)2SO4 1.5g/L， MgCl2 0.5g/L， 配制时按顺序 添加上述成分， 并且在每一 成分混匀后再添加下一成分， 待 上述添加成分全部溶解后， 添加 磷酸三钙1g/L摇匀， 然后添加琼脂粉20g/L混匀后用蒸馏水补足， 并调pH至6.0， 高温灭菌说　明　书 1/7 页 3 CN 115181701 A 3