(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210760050.4 (22)申请日 2022.06.30 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M 20212 23 2021.0 3.12 (71)申请人 商丘师范学院 地址 476002 河南省商丘市梁园区平 原中 路55号 (72)发明人 王亚月　向巧　王梦娇　周庆峰　 裴冬丽　 (74)专利代理 机构 郑州优盾知识产权代理有限 公司 41125 专利代理师 冉珊敏 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C02F 3/34(2006.01)C12R 1/38(2006.01) C02F 101/34(2006.01) C02F 101/36(2006.01) (54)发明名称 一株降解卤代酸的假单胞菌W52及其应用 (57)摘要 本发明提供了一株 降解卤代酸的假单胞菌 W52及其应用， 所述假单胞菌W52的分类名为 Pseudomonas  sp.W52， 已于2021年3月12日保藏 于中国典型培养物保藏中心， 保藏号为CCTCC  M  2021223。 本发明所述的假单胞菌W52从大连海 域 的海绵上分离得到， 能够有效降解多种卤代酸， 其中对2‑溴丙酸、 单溴乙酸、 单氯乙酸和二氯乙 酸可完全降解， 并制备假单胞菌W52的静息细胞， 使菌株在降解卤代酸的同时具备对高浓度卤代 酸的耐受能力。 本发明拓展了降解卤代有机化合 物的微生物的来源范围， 有效降解了卤代酸， 对 治理环境中卤代酸污染、 保护生态环境、 防治地 下水污染以及保护人类身体健康等方面都具有 重要意义。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图5页 CN 114990027 A 2022.09.02 CN 114990027 A 1.一株假单胞菌W52， 其特征在于： 所述假单胞菌W52的分类名为 Pseudomonas  sp.  W52， 已于2021年3月12日保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏号为CCTCC  M 2021223， 保 藏地址为中国.武汉.武汉大 学。 2.权利要求1所述的假单胞菌W52在制备假单胞菌W52静息细胞降解废水卤代酸中的应 用， 包括以下步骤： （1） 将假单胞菌W52接入2 ‑氯丙酸液体培养基培养， 然后进行离心， 去除上清液， 收集得 到假单胞菌W52菌体； （2） 将步骤 （1） 收集的假单 胞菌W52菌体洗涤并重悬， 得到假单 胞菌W52静息细胞 悬液； （3） 将步骤 （2） 的假单 胞菌W52静息细胞 悬液接种到废水中， 降解废水中的卤代酸。 3.根据权利要求2所述的制备假单胞菌W52静息细胞降解废水卤代酸的应用， 其特征在 于： 所述步骤 （1） 中假单 胞菌W52的接种量 为2‑氯丙酸液体培 养基体积的1%。 4.根据权利要求2或3所述的制备假单胞菌W52静息细胞降解废水卤代酸的应用， 其特 征在于： 所述步骤 （1） 中2 ‑氯丙酸液体培养基的体积为200mL， 配制方法为向无机盐基础培 养基中加入终浓度20mmol/L的2 ‑氯丙酸； 培养的条件为温度30℃、 转速200rpm培养40 ‑50h 至OD600=0.6‑1。 5.根据权利要求4所述的制备假单胞菌W52静息细胞降解废水卤代酸的应用， 其特征在 于， 所述无机盐基础培养基的配方为： Na2HPO4·12H2O 12g/L、 NaH2PO4·2H2O 1g/L、 NaCl   30g/L、 酵母 浸粉 0.1g/L、 (NH4)2SO4 2.0g/L和MgSO4·7H2O 0.1g/L， 余 量为水， pH7.0 ‑7.5。 6.根据权利要求5所述的制备假单胞菌W52静息细胞降解废水卤代酸的应用， 其特征在 于， 所述步骤 （2） 中洗涤的具体操作为： 用50mmol/L、 p H7.5的无菌KH2PO4‑K2HPO4缓冲液连续 洗涤步骤 （1） 收集的假单 胞菌W52菌体两次。 7.根据权利要求6所述的制备假单胞菌W52静息细胞降解废水卤代酸的应用， 其特征在 于， 所述步骤 （2） 中重悬的具体操作为： 用50mmol/L、 p H7.5的无菌KH2PO4‑K2HPO4缓冲液将洗 涤后的假单 胞菌W52菌体重悬至假单 胞菌W52的菌落总数为106 CFU/mL。 8.根据权利要求7所述的制备假单胞菌W52静息细胞降解废水卤代酸的应用， 其特征在 于： 所述步骤 （3） 中假单 胞菌W52静息细胞 悬液的接种量 为悬液体积的5%。 9.根据权利 要求2、 3或5 ‑8任一项所述的应用， 其特征在于： 所述卤代酸为卤代乙酸、 卤 代丙酸、 卤代丁 酸和二卤代酸中的至少一种。 10.根据权利要求9所述的制备假单胞菌W52静息细胞降解废水卤代酸的应用， 其特征 在于： 所述卤代乙酸包括单氯乙酸、 单溴乙酸和单碘乙酸， 所述卤代丙酸包括2 ‑氯丙酸、 2 ‑ 溴丙酸、 2 ‑溴‑2‑甲基丙酸和3 ‑氯丙酸， 所述卤代丁酸包括2 ‑氯丁酸、 2 ‑溴丁酸， 所述二卤代 酸包括二氯乙酸和2， 2 ‑二氯丙酸。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114990027 A 2一株降解卤代酸 的假单胞菌W52及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及微 生物技术领域， 尤其涉及一株降解卤代酸的假单 胞菌W52及其应用。 背景技术 [0002]卤代有机化合物是一类含有卤素基团的有机化合物的总称， 广泛应用于医药、 工 农业生产等领域， 具有疏水性、 低水溶性、 相对的化学稳定性和空气 中不易燃烧的特点， 长 期以来在环境中无节制的释放以及不断地转化、 积累和富集， 对环境和人类身体健康造成 了极大的危害。 因此， 如何实现卤代有机化 合物的有效降解是当前亟 待解决的问题。 [0003]微生物作为自然界中主要分解者， 将复杂的有机物转化为简单的化合物， 从而保 持生命元素的循环往复， 而生长在被有机卤代物污染的环境中的微生物其实也具有转化这 些化合物的潜在能力。 近年来， 微生物降解法由于获得降解效率高、 降解底物广谱、 菌株适 应性强的特点， 已成为去除有机卤代污染物的有效方法 之一。 [0004]尽管目前已有不少关于卤代有机化合物降解菌菌种资源的报道， 但是， 一方面脱 卤微生物菌株多集中在对卤代脂肪烃、 卤代芳烃等的降解， 有关专门降解卤代酸的菌株还 比较少见； 另一方面脱卤微生物菌株多分离于陆生环境， 降解的效率不高且底物谱范围较 窄， 应用时受到限制。 例如， 专利号为CN111378601A的专利公开了一种从土壤中分离得到的 卤代苯酚降解菌株及其生产的菌剂； 专利号为CN113957014A的专利公开了一种同样从土壤 中分离得到的功能菌株， 兼具多卤代烃降解和铬(VI)还原活性的作用。 不同分离环境的差 异， 可对微生物法处理有机卤代污染物的工艺及处理效果产生影响。 因此， 尝试从其他环 境 分离可降解卤代有机化合物的微生物菌株， 拓展降解卤代有机化合物的微生物分离范围， 并提高卤代有机化 合物降解效率及拓 宽卤代酸底 物谱很有必要。 发明内容 [0005]针对当前脱卤微生物分离范围小以及对卤代酸降解率、 降解种类研究有限的问 题， 本发明提出一株降解卤代酸的假单 胞菌W52及其应用。 [0006]为了达到上述目的， 本发明的技 术方案是这样实现的： 一株假单胞菌W52， 菌株分类名为 Pseudomonas  sp. W52， 已保藏于中国典型培养 物保藏中心， 保藏号为CCTCC  M 2021223， 保藏时间为2021年3月12日， 保藏地址为中国.武 汉.武汉大 学。 [0007]其中， 所述假单胞菌W52菌体为短杆状， 在平板上为圆形， 隆起， 边缘不齐整， 表面 湿润， 淡黄色不透明。 [0008]本发明内容还包括所述的假单胞菌W52在制备假单胞菌W52静息细胞降解废水卤 代酸中的应用， 包括以下步骤： （1） 将假单胞菌W52以2 ‑氯丙酸液体培养基体积1%的量接入2 ‑氯丙酸液体培养基 （200mL） ， 温度30℃、 转速200rp m培养40‑50h至OD600=0.6‑1， 然后进行离心， 去除上清液， 收 集得到假单 胞菌W52菌体。说　明　书 1/6 页 3 CN 114990027 A 3