(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211103596.9 (22)申请日 2022.09.09 (83)生物保 藏信息 CGMCC No. 25659 2022.09.07 (71)申请人 中国科学院沈阳应用生态研究所 地址 110016 辽宁省沈阳市沈河区文化路 72号 (72)发明人 李晓军　苏一鸣　张锶　王英刚　 巩宗强　贾春云　 (74)专利代理 机构 沈阳科苑专利商标代理有限 公司 210 02 专利代理师 李颖 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) B09C 1/10(2006.01)C02F 3/34(2006.01) C12R 1/05(2006.01) C02F 101/34(2006.01) C02F 101/38(2006.01) C02F 101/36(2006.01) (54)发明名称 一株降解恩诺沙星的低温降解菌株及其应 用 (57)摘要 本发明属于环 境微生物 修复技术领域， 特别 涉及一株能够降解恩诺沙星的低温降解菌株及 其 应 用 。 菌 株 为 产 碱 杆 菌 属 (Alcaligen esammonioxydans)， 命名为Y ‑ENR， 已 于2022年09月07日保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心， 保藏编号为： CGMCC   No:25659。 本发明所得菌株在0 ‑15℃的温度范 围、 中性或低碱环境(畜禽粪便堆放地)中， 低温 降解菌株能够高效地降解恩诺沙星。 15℃条件 下， 投加量为5％的低温 降解菌株3d对恩诺沙星 的降解率可达 73.38％。 4℃条件下， 投加量为5％ 的低温降解菌株14d对恩诺沙星的降解率可达 34.31％。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 115404186 A 2022.11.29 CN 115404186 A 1.一株降解恩诺沙星的低温降解菌株， 其特征在于： 菌株为产碱杆菌属(Alcaligenes   ammonioxydans)， 命名为Y ‑ENR， 已于2 022年09月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心， 地址： 北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏编号 为： CGMCC No:25659。 2.一种权利要求1所述菌株的应用， 其特征在于： 所述菌株在低温环境下对水体污染修 复中的应用。 3.按权利要求2所述菌株的应用， 其特征在于： 所述菌株在低温中性或低碱环境下对降 解污染水体中抗 生素中的应用。 4.按权利要求3所述菌株的应用， 其特 征在于： 所述 抗生素为恩诺沙星； 低温为0 ‑15℃。 5.一种低温土壤污染修复菌剂， 其特 征在于： 所述菌剂含权利要求1所述菌株。 6.按权利要求5所述水体污染修复菌剂， 其特征在于： 所述菌剂含有该菌株的培养液、 培养液浓缩物或培 养菌悬液。 7.按权利要求6所述水体污染修复菌剂， 其特征在于： 所述菌剂培养液为将所述产碱杆 菌属(Alcaligenes  ammonioxydans)置于LB液体培养基中培养至对数生长期， 即获得培养 液； 培养液离心收集 沉淀， 沉淀经 无菌生理盐水重悬至OD600为0.8～1.2的菌悬 液。 8.一种权利要求5所述菌剂的应用， 其特征在于： 所述菌剂在中性或低碱环境下降解污 染水体中抗 生素的应用。 9.一种权利要求5所述菌剂的使用方法， 其特征在于： 将所述菌剂施加至0 ‑15℃低温环 境下待处 理污染水体中， 按5～10wt％的接种量施加入待处 理污染水体中。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115404186 A 2一株降解恩诺沙星的低温降解菌株及其应用 技术领域 [0001]本发明属于环境微生物修复技术领域， 特别涉及 一株能够降解恩诺沙星的低温降 解菌株及其应用。 背景技术 [0002]恩诺沙星(Enrofloxacin,ENR)是一种人工合成的动物专用喹诺酮类抗生素， 具有 抗菌谱广、 活性 强等特点， 常用于畜禽感染性疾病预防和治疗。 进入 畜禽体内的抗生素不会 被全部吸收， 约有30％～90％会随着 尿液或粪便排出， 进入环 境。 ENR是一种两性分子(pKa1 ＝5.88～6.06， pKa2＝7.70～7.74)， 正常环境下亨利定律常数极低， 挥发损失可忽略不计， 但其辛醇‑水分配常数(Ko w)较低， 易在土壤中积累和迁移， 检出率高， 威胁生态系统安全。 [0003]研究发现， 在我国畜禽粪便中最常检出的抗生素为喹诺酮类， 其中猪粪 中ENR平均 检出浓度达到4.68mg ·kg‑1。 且我国农田土壤中E NR的检出率高， 残留浓度范围在0～1347.6 μg·kg‑1， 均值介于0～99.4 μg ·kg‑1之间， 最大值接近澳大利亚农田土壤标准370 μg ·kg‑1 的4倍。 长三角典型城郊地区农田、 林地和园地的EN R检出率高达70％以上， 农田 的检出率达 100％。 调查东莞市18个区镇2 4个代表性蔬菜基地土壤中喹诺酮类抗生素的含量， 结果表明 4种喹诺酮类抗生素的检出率均在90 ％以上， 以恩诺沙星(平均含量19.  85 μg·kg‑1)为主， 部分含量超过了 抗生素生态 毒害效应触发值(100 μg ·kg‑1)。 ENR等喹诺酮类 抗生素进入环 境带来的生态 环境风险已经 得到了关注。 [0004]微生物修复是解决土壤抗生素污染问题的有效手段。 王强锋等从重金属污染的土 壤中分离筛选出四株能降解土霉素、 诺氟沙星、 磺胺二甲嘧啶的真菌菌株， 其中菌株KS272 在初始浓度1500 μg ·L‑1、 30℃、 150r ·min‑1条件下避光培养7d后， 对土霉素、 诺氟沙星的降 解率分别达到40.29 ％、 10.59 ％。 Hirth等人从加拿大土壤中分离出有效降解磺胺二甲嘧 啶的微杆菌  (Microbacterium  sp.)菌株。 近年研究发现， 苍白杆菌属(Ochrobactrum   sp.)、 双头菌属(Labrys  sp.)和戈登氏菌属(Gordonia  sp.)对磺胺甲恶唑的降解率为   45.2％～62.2％。 巩宗强等研究发现， 将哈特草螺菌(H erbaspirillum  huttiense)  加入至 含有1mg/L恩诺沙星的无机盐培养基中， 接种量2％， 15℃、 150r ·min‑1避光培养3d， 对恩诺 沙星的降解效果达58.27％(已扣除自然降解部分)。 可以看出， 微生物能够 有效降解抗生素 的含量， 但目前针对低温条件下的菌株筛 选和评估工作还不多见。 [0005]我国北方地区秋冬季气温低， 周期长， 较大限制了中高温菌的应用， 因此， 增强低 温降解菌的研究对于低温地区的土壤抗生素污染治理具有重要意义。 畜禽粪便堆放地土壤 通常具有较高的含盐量和抗生素含量， 因此筛选耐盐的恩诺沙星降解菌是很有必要的， 目 前关于适应北 方低温耐盐环境的恩诺沙星降解菌还未 见报道。 发明内容 [0006]针对现有技术的不足之处， 本发明要解决的技术问题是提供一株降解恩诺沙星的 低温降解菌株及其应用。说　明　书 1/6 页 3 CN 115404186 A 3