(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210621801.4 (22)申请日 2022.06.02 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.24677 2022.04.14 (71)申请人 青岛农业大 学 地址 266109 山东省青岛市城阳区长城路 700号 (72)发明人 梁晨　沈莲花　李守望　赵洪海　 (74)专利代理 机构 青岛鼎丞智佳知识产权代理 事务所(普通 合伙) 3727 7 专利代理师 王敬花　韩耀朋 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 3/00(2006.01)C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一株高地芽孢杆菌HMQAU2 0091、 菌剂及其制 备方法和应用 (57)摘要 本发明提供了一株高地芽孢杆菌(Bacillus   altitudinis)菌株HMQAU20091， 该菌株于2022年 4月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心， 保藏登记号： CGMCC  No.24677。 本发明还 提供了一种由高地芽孢杆菌(Bacillus   altitudinis)菌株HMQAU20091制备 的微生物菌 剂， 所述微生物菌剂含有菌株HMQAU20091和/或 菌株HMQAU2 0091的代谢产物。 本发明还 提供了一 种微生物菌剂的制备方法。 本发 明还提供了一种 微生物菌剂的应用。 本发明还提供了一种植物病 害的防治方法。 本发明通过室内毒力测定， 证明 了菌株HMQAU20091对黄瓜霜霉病菌等多种病原 菌具有良好的抑制活性。 菌株HMQAU2 0091的发酵 滤液作为生防菌剂， 具有生活周期短、 易于人工 培养的优点， 是一种选择性强、 无污染、 对环境友 好的生防菌 株， 病原菌不 易产生抗药性。 权利要求书1页 说明书15页 序列表2页 附图5页 CN 114874948 A 2022.08.09 CN 114874948 A 1.一株高地芽孢杆菌(Bacillus  altitudinis)菌株HMQAU20091， 其特征在于， 菌株于 2022年4月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心， 保藏登记号： CGMCC No.24677。 2.一种由权利要求1所述的高地芽孢杆菌(Bacillus  altitudinis)菌株HMQAU20091制 备的微生物菌剂， 其特征在于， 所述微生物菌剂含有菌株HMQAU20091和/或菌株HMQAU20091 的代谢产物。 3.根据权利要求2所述的微生物菌剂， 其特征在于， 所述微生物菌剂的有 效活性成分为 菌株HMQAU20091的发酵 液或者发酵 滤液。 4.根据权利要求3所述的微生物菌剂， 其特征在于， 所述微生物菌剂的有 效活性成分为 高地芽孢杆菌HMQAU20091的发酵滤液， 其微生物菌剂中的高地芽孢杆菌HMQAU20091的活菌 浓度为1×109‑1010CFU/mL。 5.根据权利要求 4所述的微 生物菌剂的制备 方法， 其特 征在于， 具体步骤 包括： (1)菌株HMQAU20091种子菌液的培养： 将权利要求1所述的菌株HMQAU20091接种到LB培 养液中培养， 直到种子菌液OD值在0.5 ‑0.8之间时结束培养， 获得菌株HMQAU20091种子菌 液； (2)发酵滤液的制备： 采用血球计数板调节步骤(1)获得的种子菌液的浓度为5 × 108CFU/mL， 以体积 百分含量1％的比例加入装有 发酵培养液的锥形瓶中， 振荡培养， 然后离 心， 过滤制备拮抗菌的无菌 菌株HMQAU20091发酵滤液， 即得菌株H MQAU20091发酵滤液。 6.根据权利要求5所述的微生物菌剂的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中的培养 指在30℃、 200rpm条件下振荡培 养8‑10h。 7.根据权利要求5所述的微生物菌剂的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(2)中的发酵 培养液配方为： 胰蛋白胨10g/L， 酵母 粉5g/L， 氯化钠10g/L， 调节pH值 为7.2‑7.4。 8.根据权利要求2所述的微生物菌剂的应用， 其特征在于， 所述微生物菌剂用于植物病 害的防治， 所述植物病害包括百合灰霉病、 菜豆灰霉病、 大蒜菌核病、 芹菜菌核病、 大白菜菌 核病、 番茄灰叶斑病、 小麦赤霉病、 葡萄白腐病、 蓝莓毛色二孢枝枯病、 菠菜腐霉根腐病、 蓝 莓疫霉根腐病、 生菜叶斑病、 菠菜镰孢菌根腐病、 蓝莓叶斑病、 山药镰孢菌根腐菌、 大豆黑斑 病、 藜麦枝枯病、 胡萝卜软腐病、 大蒜干腐病、 猕猴桃软腐病、 黄瓜褐斑病、 黄瓜黑星病或者 黄瓜霜霉病。 9.一种植物病 害的防治方法， 其特征在于， 所述方法是利用权利要求1所述的高地芽孢 杆菌(Baci llus altitudi nis)菌株H MQAU20091或者权利要求2所述的微 生物菌剂处 理。 10.根据权利要求9所述的植物病 害的防治方法， 其特征在于， 在防治植物病 害时， 将如 权利要求1所述的高地芽孢杆菌(Bacillus  altitudinis)菌株HMQAU2 0091或者如权利要 求 2所述的微生物菌剂对植物的发病部位种球包衣、 浸渍、 喷涂、 雾化、 灌溉、 挥发、 撒粉、 撒播、 发泡、 涂布、 浇灌、 滴水灌溉或者喷雾使用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114874948 A 2一株高地芽孢杆菌HMQA U20091、 菌剂及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明属于植物保护技术领域， 具体涉及一株高地芽孢杆菌HMQAU20091、 菌剂及 其制备方法和应用。 背景技术 [0002]农业生产上有许多顽固的老病害和一些新出现的病害， 严重威胁大田作物、 蔬菜、 果树以及花卉生产的产前， 产中和产后， 为了探索农业全产业链中病害防治的新手段， 我们 选取当地生产和市场中的重要植物病害如百合灰霉病、 菜豆灰霉病、 大蒜菌核病、 芹菜菌核 病、 大白菜菌核病、 番茄灰叶斑病、 小麦赤霉病、 葡萄白腐病、 蓝莓毛色二孢枝枯病、 菠菜腐 霉根腐病、 蓝莓疫霉根腐病、 生菜叶斑病、 菠菜镰孢菌根腐病、 蓝莓叶斑病、 山药镰孢菌根腐 菌、 大豆黑斑病、 藜麦枝枯病、 胡 萝卜软腐病、 大蒜干腐病、 猕猴桃软腐病、 黄瓜褐斑病、 黄瓜 黑星病、 黄瓜霜霉病等病害开展相关研究。 常规防治以上植物病害的措施有很多， 但是农业 防治费时费力， 成效慢； 采用生态防治， 环 境条件不易控制； 化学农药易产生农药残留， 对人 类健康造成不良影响并且污染环境， 生物防治对环境友好、 高效、 无污染的特点， 成为研究 防治植物病害的新方向。 [0003]例如黄瓜(Cucumis  sativus)， 隶属葫芦科黄瓜属， 起源于喜马拉雅山南麓的热带 雨林地区， 为1年蔓生草本植物， 在我国已有两千多年的栽培历史(李怀智， 2003)， 目前已成 为全球十大蔬菜栽培作物之一， 全世界年栽培面积约为146.67hm2(何晓明等， 2002)。 黄瓜 在中国南、 北方均有栽培(熊艳等， 2016)， 据农业农村部统计2015年黄瓜在全国种植面积为 1887万亩， 产量达5938万吨， 分别占到蔬菜总体的5.8％、 7.8％， 其市场需求量大， 有巨大的 经济效益和社会效益。 目前黄瓜生产保护地栽培面积迅速扩大， 效益显著高于露地栽培(赵 国云等， 2008)。 古巴假霜霉(Pseudoperonospora  cubensis)是黄瓜霜霉病的病原菌。 黄瓜 霜霉病是世界黄瓜产区的叶部重要病害之一(Thomas， 1986)， 也是保护地黄瓜上的一种毁 灭性病害， 严重影响黄瓜的产量和品质(傅淑云， 1983； 石延霞， 20 02)。 [0004]但是， 现有技术中缺少对黄瓜霜霉病等以上多种植物病害具有较高防效的生防制 剂。 如何解决上述问题， 是目前微 生物领域需要解决的技 术问题。 发明内容 [0005]本发明旨在针对现有技术的不足， 提供一株高地芽孢杆菌HMQAU20091、 菌剂及其 制备方法和应用。 [0006]本发明第一个目的在于提供一种从黄瓜叶面上分离得到的生防细菌——高地芽 孢杆菌(Bacillus  altitudinis)菌株HMQAU20091， 丰富了植物病害生防菌的菌种资源， 为 研究开发生物菌剂奠定基础。 该高地芽孢杆菌(Bacillus  altitudinis)菌株HMQAU2 0091在 本发明中或被简称为 “菌株HMQAU20091”。 [0007]本发明第二个目的在于提供一种利用上述菌株H MQAU20091制备的微 生物菌剂。 [0008]本发明第三个目的在于提供 上述微生物菌剂的制备 方法。说　明　书 1/15 页 3 CN 114874948 A 3