(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211049779.7 (22)申请日 2022.08.30 (71)申请人 云南博仕奥生物技 术有限公司 地址 650000 云南省昆明市宜良县 工业园 区 (72)发明人 李伟　蔡发国　黎跃坤　杜景德　 (74)专利代理 机构 成都明涛智创专利代理有限 公司 51289 专利代理师 邓华英 (51)Int.Cl. C12N 9/96(2006.01) C12N 9/54(2006.01) C12N 1/20(2006.01) B01D 1/18(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种中性蛋白酶微丸及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种中性蛋白酶微丸及其制 备方法， 属于微生物发酵和酶工程技术领域； 采 用该制备方法依次通过枯草芽孢杆菌发酵菌种 到种子液， 再到酶活力在20000U/mL以上的发酵 液的制备； 然后经过离心除杂、 过滤除菌、 超滤浓 缩、 造粒酶液制备和喷雾制粒等一系列操作后制 得粒度均匀、 活性成分均匀的中性蛋白酶微丸， 生产高效且生产成本低， 推广应用前景广阔， 经 济效益更高。 权利要求书1页 说明书5页 CN 115232806 A 2022.10.25 CN 115232806 A 1.一种中性蛋白酶微丸制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 将枯草芽孢杆菌 菌种接种在茄子瓶 LB培养基中， 制得发酵菌种； S2、 将发酵菌种接种于种子罐内的培养基， 在温度33～34℃， 转速180rpm， 风量40～ 50m3/h环境下培 养18～20h， 制得种子液； S3、 将步骤S2中的种子液接入产酶发酵罐的发酵培养基中， 在温度35～38℃， 转速140 ～160rpm， 风量1:0.8‑1:1VVM环境下培 养26～30h， 制得发酵 液； S4、 离心除杂： 将发酵 液打入卧螺 离心机中， 收集离心液； S5、 过滤除菌： 将收集的离心液打入陶瓷膜过 滤， 收集过 滤酶液； S6、 超滤浓缩： 将收集到的过滤酶液打入超滤浓缩设备， 进行酶液的浓缩， 浓缩倍数为 3‑5倍， 制得浓 缩酶液； S7、 造粒酶液制备： 在浓缩酶液中加入糊精或羧甲基纤维素、 轻质碳酸钙、 玉米淀粉， 搅 拌均匀； S8、 喷雾制粒： 将造粒酶液通过隔膜泵打入喷雾 干燥塔中进行雾化干燥、 制粒。 2.根据权利要求1所述的中性蛋白酶微丸制备方法， 其特征在于： 步骤S1中培养条件为 在温度35℃条件下培 养28～36h。 3.根据权利要求1所述的中性蛋白酶微丸制备方法， 其特征在于： 步骤S2中种子罐内的 培养基为： 玉米20g/L， 豆粕70g/L， Na2HPO4 4g/L， KH2PO4 0.3g/L， 发酵菌种接种量 为2％。 4.根据权利要求1所述的中性蛋白酶微丸制备方法， 其特征在于： 步骤S3 中发酵培养基 为： 玉米58g/L， 豆粕42g/L， 麸皮5 0g/L， Na2HPO4 4.5g/L， KH2PO40.3g/L， PH自然。 5.根据权利要求1所述的中性蛋白酶微丸制备方法， 其特征在于： 步骤S4中卧螺离心机 转速2900～3000rpm， 离心时间4～5 h。 6.根据权利要求1所述的中性蛋白酶微丸制备方法， 其特征在于： 步骤S5 中陶瓷膜过滤 孔径为500nm， 过滤时间8～10 h。 7.根据权利要求1所述的中性蛋白酶微丸制备方法， 其特征在于： 步骤S7中各成分的加 入量为： 8‑12％糊精或羧甲基纤维素， 轻质碳 酸钙20‑30％， 玉米淀粉10 ‑20％。 8.根据权利要求1所述的中性蛋白酶微丸制备方法， 其特征在于： 步骤S8中雾化喷嘴型 号为1.8mm或2.0mm； 隔膜泵压力为40 ‑45Hz； 干燥条件： 进口温度150 ‑200℃， 塔温70 ‑80℃， 出风口温度70 ‑75℃。 9.一种中性蛋白酶微丸， 其特征在于： 采用权利要求1 ‑8任意一项所述的中性蛋白酶微 丸制备方法制备而成。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232806 A 2一种中性蛋白酶微丸及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明公开了一种中性蛋白酶微 丸， 还公开了一种中性蛋白酶微 丸制备方法， 属 于发酵技 术及制剂技 术领域。 背景技术 [0002]作为动物本身可以分泌的内源酶的一种——蛋白酶， 是催化肽键水解的一种 酶， 存在于动物内脏、 植物茎叶、 果实和微生物中， 已广泛应用在皮革、 毛皮、 丝绸、 医药、 食品、 酿造等方面。 由于其特殊性、 复杂性， 一直以来都是作为复合酶的一个组分被使用。 近年来 由于养殖者对动物生产最大潜能的开 发、 蛋白原料价格的上涨以及由简单日粮向复杂日粮 的转变， 科研工作者对于单一蛋白酶和复合蛋白酶的研究也日渐增多。 蛋白酶针对蛋白质 中的肽键进行水解， 最终的产物是氨基酸， 因此外加蛋白酶改善动物生长性能的前提主要 是其能否对动物 氨基酸消化利用率产生有利影响。 [0003]动物在摄取蛋白质后， 经过蛋白酶与其它酶的协同作用， 最后转变为游离氨基酸， 从而满足动物正常新陈代谢对氨基酸的需要。 蛋白酶按照作用pH范围主要分为酸性蛋白 酶、 中性蛋白酶和碱性蛋白酶三种， 其中中性蛋白酶因作用条件温和， 广泛应用于食品、 医 药以及饲料等领域。 而蛋白酶目前主要以微生物代谢生产为主， 且市场中性蛋白酶制剂以 粉末型为主， 此类酶制剂用于动物饲料时， 能够明显提高饲料中蛋白质 利用率和动物的生 产性能， 同时降低成本 。 [0004]但由于大部分酶制剂为粉剂， 粉剂存在不 同环境中耐温性能和稳定性较差， 使用 时粉尘污染严重， 存在浪费的弊端， 还易对皮肤造成过敏损伤。 为解决上述弊端， 有研究者 以及从业者将粉剂酶制剂制备成微丸颗粒， 比如申请号为200410051993.1的中国发 明专利 申请公开了一种多色微丸型饲用复合 酶及其制造方法， 申请号为201410638 567.1的中国发 明专利申请公开了一种复合 酶包衣微丸及其制备方法， 申请号为202111548278.9的中国发 明专利申请公开了一种颗粒中性蛋白酶及其制备方法； 均提到了制备微丸型颗粒的制备方 法， 但采用的方法为挤压式、 摇摆式或流化床制成微丸。 而摇摆制粒， 挤压制粒、 滚筒制粒、 旋流流化床制粒等传统制备方法存在单位时间产量低， 效率低， 成本高， 微丸粒度均匀度 差， 活性成分不均匀等 缺点， 不能满足 实际的生产需求。 发明内容 [0005](一)要解决的技 术问题 [0006]本发明要解决的技术问题是解决现有的中性蛋白酶粉剂酶制剂活性稳定性差， 而 传统造粒工艺费时、 产量低、 粒度和活性成分不均匀的问题。 [0007](二)技术方案 [0008]为了解决上述技术问题， 本发明提供了一种中性蛋白酶微 丸制备方法， 其包括以 下步骤： [0009]S1、 将枯草芽孢杆菌 菌种接种在茄子瓶 LB培养基中， 制得发酵菌种；说　明　书 1/5 页 3 CN 115232806 A 3