(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211140427.2 (22)申请日 2022.09.19 (71)申请人 江西省科 学院微生物研究所 （江西 省流域生态研究所） 地址 330000 江西省南昌市高新 技术开发 区昌东大道7 777号 申请人 江西鑫维生物技 术有限公司 (72)发明人 郭建军　袁林　曾静　聂俊辉　 黄国昌　熊大维　王通　岳斯源　 (74)专利代理 机构 深圳市智旭鼎浩知识产权代 理事务所(普通 合伙) 44746 专利代理师 周超 (51)Int.Cl. C12N 1/04(2006.01) C12N 1/20(2006.01)C12R 1/01(2006.01) C12R 1/25(2006.01) C12R 1/23(2006.01) C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称 一种乳酸菌发酵稳定剂及其制备方法和应 用方法 (57)摘要 本发明公开了一种乳酸菌发酵稳定剂及其 制备方法和应用方法， 所述乳酸菌发酵稳定剂 包 括糖类， D ‑氨基酸及磷酸氢钙和抗坏血酸钠， 所 述乳酸菌发酵稳定剂为乳酸菌的发酵培养提供 营养成分能被有效利用， 提高了在乳酸菌培养后 发酵液中活菌数； 采用所述乳酸菌发酵稳定剂 进 行培养后的乳酸菌菌体在形态上变得又短又卵 圆， 使菌体表面积减小； 改性了乳酸菌菌体细胞 壁形状和强度， 维持了其细胞膜和细胞壁的完整 性； 减少在冷冻过程中形成的冰晶对菌体的损 伤， 提高了乳酸菌的冷冻干燥的抗逆性， 提高了 乳酸菌在常温下的存活率； 本发 明提供的乳酸菌 发酵稳定剂， 配方组成简单、 成本低廉， 应用操作 简便， 能使乳酸菌的性质更稳定、 生物活性更强、 常温贮藏更久 。 权利要求书1页 说明书14页 附图1页 CN 115491309 A 2022.12.20 CN 115491309 A 1.一种乳酸菌发酵稳定剂， 其特征在于， 包括糖， 氨基酸， 无机盐和生长因子， 所述无机 盐为磷酸氢钙。 2.如权利要求1所述的乳酸菌发酵 稳定剂， 其特 征在于， 所述氨基酸 为D‑氨基酸。 3.如权利要求1所述的乳酸菌发酵 稳定剂， 其特 征在于， 所述 生长因子是抗坏血酸钠。 4.如权利要求2所述的乳酸菌发酵稳定剂， 其特征在于， 所述D ‑氨基酸中包含D ‑半胱氨 酸(D‑Cys)和D‑异亮氨酸(D ‑Leu)。 5.如权利要求3所述的乳酸菌发酵稳定剂， 其特征在于， 所述乳酸菌发酵稳定剂包括以 下组分： 按质量分数计， 12～20％的蔗 糖、 0.3～2.7％的D ‑氨基酸、 0.3～1.8％的抗坏血酸 钠、 2.5～6.5％的磷酸氢钙。 6.如权利 要求5所述的乳酸菌发酵稳定剂， 其特征在于， 所述0.3～2.7％的D ‑氨基酸为 0.1～1.2％的D ‑半胱氨酸(D ‑Cys)和0.2 ～1.5％的D ‑异亮氨酸(D ‑Leu)。 7.如权利要求1至6中任一所述的乳酸菌发酵稳定剂， 其特征在于， 所述乳酸菌为屎肠 球菌、 粪肠球菌、 乳酸肠球菌、 乳酸片球菌、 嗜酸乳杆菌、 植物乳杆菌、 乳酸乳杆菌中的一种 或两种以上。 8.一种乳酸菌发酵 稳定剂的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤一， 在蒸馏水中依次加入糖、 D ‑氨基酸、 磷酸氢钙及抗坏血酸钠， 搅拌均匀得到混 合液； 步骤二， 将所述混合液于1 10～125℃下灭菌15～ 25min。 9.一种乳酸菌发酵 稳定剂的应用方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤一， 将活化的乳酸菌接种到发酵培养基/液中， 于37℃下培养8～12小时， 得到含乳 酸菌的发酵培 养基/液A； 步骤二， 将乳酸菌发酵稳定剂添加至所述发酵培养基/液A中， 于37℃下继续培养3～5 小时， 得到含乳酸菌的发酵培 养基/液B； 步骤三， 将所述含乳酸菌的发酵培 养基/液B进行离心浓 缩得到乳酸菌菌泥； 步骤四， 加入保护剂冷冻干燥后得到 菌粉， 所述菌粉贮藏在常温条件下。 10.如权利要求9所述的乳酸菌发酵稳定剂的应用方法， 其特征在于， 所述乳酸菌发酵 稳定剂添加到 乳酸菌发酵 液中的质量比为8～15％。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115491309 A 2一种乳酸菌发酵稳定剂及其制备方 法和应用方 法 技术领域 [0001]本发明涉及乳酸菌， 尤其涉及一种乳酸菌发酵稳定剂及其制 备方法， 在常温条件 下贮藏， 应用所述乳酸菌发酵 稳定剂提高乳酸菌 菌粉存活率的方法。 背景技术 [0002]乳酸菌(LAB)是一类革兰氏染色阳性菌， 可分为球菌和杆菌， 能够发酵糖类产生以 乳酸为主的产物， 具有抑制有害微生物生长、 调整肠道菌群平衡、 增强机体免疫力， 是肠道 重要的功能性菌群。 乳酸菌能够为机体提供营养物质， 促进机体生长。 乳酸菌对 人和动物都 有保健和治疗功效， 国内外均有 大量动物和临床试验证明。 乳酸菌作为一种益生菌， 对维持 哺乳动物肠道菌群平衡具有重要作用， 其产品广泛应用于食品、 医疗与畜牧养殖领等领域。 乳酸菌对人及动物体的健康起到举足轻重的作用， 而有效的活菌数是其在人及动物体肠道 发挥作用的重要因素。 目前市售的绝大多 数乳酸菌活菌制剂存在一个需要解决 的非常关键 的问题： 乳酸菌对环境温度、 氧气、 湿度非常敏感， 产品在常温下有效保质时间短， 有 些虽然 出厂时活菌数较高， 但在常温运输及贮存下活菌量下降迅速， 导致在应用效果不佳， 如果产 品进行冷链运输和低温储存下销售， 又影响了产品的应用方式和产品效果， 还提高产品的 能耗， 因此乳酸菌的稳定性的解决关系到微生态制剂更好和更广泛的应用、 以及提高生产 企业的生产效率。 [0003]目前采用提高乳酸菌的常温稳定性的方法， 主要为通过热激处理提高乳酸菌制剂 的热稳定性， 如公布 号为CN 105316261A一种提高乳酸菌制剂热稳定性的方法中， 所采用的 方法为： 采用鱼溶浆为营养源， 乳酸菌发酵过程中采用程序性变温控制， 在乳酸菌发酵周期 中， 至少采用2次升温热激发酵处理。 热激处理是在乳酸菌发酵过程中突然升温保持一段时 间， 从而提高了微生物的热稳定性， 微生物的热稳定性的提高和热激蛋白的产生有关。 该方 法需采用特定的营养源(鱼溶浆)， 且2次热激发酵处理， 发酵过程工艺复杂， 所制得的乳酸 菌的常温贮存稳定性依然不高(见[0 045]段， 3 0天的存活率 46.3±5.2％)。 [0004]另一方面， 普通的乳酸菌发酵培养 的效率较低， 乳酸菌发酵培养液中的乳酸菌活 菌数量不多， 培养液中的营养成分无法被乳酸菌有效利用； 且在发酵液中提取乳酸菌， 并采 用冷冻干燥法制得乳酸菌菌粉的过程中， 由于冰晶对乳酸菌的伤害导致冻干过程中损失部 分乳酸菌活菌， 从而乳酸菌的存活率进一 步下降。 [0005]综上所述， 提高乳酸菌发酵液中的活菌数量及增加乳酸菌 的稳定性， 同时减少冻 干过程中的乳酸菌损伤并延长乳酸菌在常温条件贮藏的存活率是充分发挥在营养保健、 食 品、 医药、 饲料 添加剂等行业中的作用所亟 待解决的问题。 发明内容 [0006]为了克服现有技术的缺点与不足， 本发明提供了一种乳酸菌发酵稳定剂及其制备 方法和应用方法， 实现以下发明目的： [0007]第一， 应用所述乳酸菌发酵稳定剂发酵培养乳酸菌后， 发酵液中的有效活菌数提说　明　书 1/14 页 3 CN 115491309 A 3