(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210705042.X (22)申请日 2022.06.21 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.24843 202 2.05.06 (71)申请人 新疆农业大 学 地址 830052 新疆维吾尔自治区乌鲁 木齐 市沙依巴克区农大东路31 1号 (72)发明人 罗明　韩剑　贺旭　陈冰　盛强　 (74)专利代理 机构 北京盛询知识产权代理有限 公司 11901 专利代理师 马文巧 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 21/00(2006.01) A01N 63/22(2020.01)A01N 63/50(2020.01) A01P 1/00(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种产脂肽类抗菌素的梨火疫病菌拮抗细 菌及其发酵 方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种产脂肽类抗菌素的梨火 疫病菌拮抗细菌及其发酵方法和应用， 属于农业 微生物技术领域。 该菌株已在中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心保藏， 分类命名为 贝莱斯芽孢杆菌， 保藏编号为CGMCC  No.24843。 该菌株产生的脂肽类抗菌素对梨火疫病菌具有 显著拮抗作用和优良的防病效果， 对高温、 酸碱、 蛋白酶、 紫外线有一定耐受性， 且生长繁殖速度 快、 竞争能力强， 可廉价生产， 具有良好的开发应 用前景。 本发 明还公开了一种提高该菌株产生脂 肽类抗菌素的发酵方法， 该方法成本低廉、 操作 简便， 同时能够提高在梨 火疫病生物防治中的效 果， 为该菌株工业化发酵生产和梨 火疫病生物农 药的研发提供了理论基础和技 术参考。 权利要求书1页 说明书14页 序列表2页 附图5页 CN 115029269 A 2022.09.09 CN 115029269 A 1.一种产脂肽类抗菌素的梨火疫病菌拮抗细菌FX1， 其特征在于， 该菌株已在中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏， 分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus   velezensis)， 保藏编 号为CGMCC  No.24843， 保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏日期为202 2年05月06日。 2.一种根据权利要求1所述的梨火疫病菌拮抗细菌FX1的发酵方法， 其特征在于， 包括 将活化的梨火疫病菌拮抗细菌FX1接种到发酵培养基中发酵培养获得其发酵液的步骤； 其 中， 所述发酵培养基的碳源为玉米淀粉， 氮源为酵母膏， 无机盐为KH2PO4和MnSO4， 所述发酵 培养的条件： 在 pH为7.0‑7.5、 转速为15 0r/min和温度为3 0‑31℃条件下发酵48h 。 3.根据权利要求2所述的发酵方法， 其特征在于， 所述发酵培养基包括以下组分： 玉米 淀粉10g、 酵母膏25 ‑25.127g、 KH2PO40.5g、 MnSO40.001g和水10 00mL。 4.根据权利要求2所述的发酵方法， 其特征在于， 所述活化的梨火疫病菌拮抗细菌FX1 的接种量 为3％v/v。 5.根据权利要求2所述的发酵方法， 其特征在于， 还包括将获得的发酵液于4℃， 12000r/min离心30min后过滤， 获得无菌发酵 液的步骤。 6.根据权利 要求5所述的发酵方法， 其特征在于， 将所述无菌发酵液调pH至2.0后， 静置 离心， 收集 沉淀， 之后用甲醇抽提， 进行真空干燥， 获得脂肽类抗菌素。 7.根据权利要求6所述的发酵方法， 其特征在于， 所述静置条件为4℃下12h； 所述离心 为4℃下， 转速为120 00r/min， 时间为3 0min。 8.一种根据权利要求1所述的梨火疫病菌拮抗细菌FX1或权利要求2中所述发酵液或权 利要求5中所述无菌发酵液或权利要求6中所述脂肽类抗菌素在防治果树梨火疫病中的应 用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述果树为蔷薇科仁果类果树， 包括梨树、 苹果、 山楂和海棠树。 10.一种防治果树梨火疫病的生物制剂， 其特征在于， 其包括权利要求1所述的梨火疫 病菌拮抗细菌FX1或权利要求2中所述发酵液或权利要求5中所述无菌发酵液或权利要求6 中所述脂肽类抗菌素。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115029269 A 2一种产脂肽类抗菌素的梨火疫病菌拮抗细菌及其发酵 方法和 应用 技术领域 [0001]本发明涉及农业微生物技术领域， 特别是涉及一种产脂肽类抗菌素的梨火疫病菌 拮抗细菌及其发酵 方法和应用。 背景技术 [0002]梨火疫病(Erwinia  amylovora)是严重危害梨、 苹果、 山楂、 海棠等蔷薇科仁果类 果树生产的毁灭性细菌病害， 被我国列为一类农作物病害和农业植物检疫性有害生物。 该 病害1780年首次发生于美国纽约州， 现已扩散传播到60多个国家和地区。 目前梨火疫病 缺 乏特效的药剂和单一的防治措施， 防治难度大， 至今仍然在多个国家持续 发生和流行， 安全 防控是一个世界性的难题。 目前使用化学药剂是梨火疫病最为普遍的防治手段。 农用链霉 素曾被认为是梨火疫病防治的最佳药剂， 但它的频繁、 大量和持续使用造成病原菌抗药性 不断增强、 防效下降； 同时农用链霉素存在通过食物链在人体中富集的风险和环境污染等 一系列问题， 我国已于2016年6月停止了登记， 2018年4月已全部退出农药市场， 目前还没有 更好的替代药剂 。 筛选和研发出新型的安全、 高效的防病药剂， 采取有力的措施阻断病害的 传播扩散是保障林果产业发展的重大需求。 [0003]发掘对病原菌具有抑菌作用的有益微生物， 利用其活体及其抑菌物质研制成生物 农药是植物病害防治的发展方向。 优良的菌剂产品不仅能达到优于或相当于化学农药的良 好防效， 还具有选择性 强、 不易产生抗药性， 安全高效、 环境友好等突出优势。 近年来国外在 梨火疫病的生物防治的相关研究和应用方面取得了一定的进展。 已有不少报道从植物叶 片、 花、 土壤中分离筛选出对梨火疫病菌具有拮抗作用的菌株， 在防效测定中表现出较好的 防病效果。 如Atur  Mikicnski(2012)等报道从苹果叶际中分离得到一株具有拮抗火疫病菌 的49M细菌菌株， 喷施后对花和果实的保护效果显著； Vanderzwet  T&Zoller  B G(1988)从 梨树花和叶分离的内生细菌中筛选出E.h.89菌株， 对花期病害的的相对控制率接近70％。 美国研发的荧光假单胞Pseudomonas  fluorescens  A506、 草生欧文氏菌Erwinia   herbicola  C9‑1等商品菌剂已进入实际应用， 达到了与农用链霉素相近的防治效果， 显示 出良好的应用前景， 成为该病害综合防治措施的切实可行的重要组成部 分。 研究发现， 梨火 疫病生防细菌的主要作用机制是通过代谢产生各种抑菌物质， 以及与病原菌的位点和营养 竞争等。 生防细菌能合成多种具有抑菌活性的次生代谢产物， 主要包括： 脂肽类、 多肽和聚 酮化合物及细菌素、 细胞壁降解酶和一些未知的抗菌蛋白等， 对多种植物病原菌产生抑制 作用。 利用微生物 次生代谢物开发生物农药， 可实现规模化生产， 耐贮性好， 功效稳定的突 出优势， 能克服以微生物活体为主要成分的生物农药在菌体定殖、 贮藏时间和施用效果易 受环境条件的影响， 产品质量稳定性不佳、 防效不理想等方面的弊端。 脂肽类抗菌素主要包 括表面活性素(surfactin)、 伊枯草菌 素(iturins)和芬芥素(fengycin)3大家族， 其理化性 质稳定， 具有广谱的抗菌、 抗病毒、 高效、 安全无毒、 不易产生耐药性等优点。 因此脂肽类生 物农药在农业和生物制药领域备受青睐， 尤其在植物病害生物防治中具有广泛的研究价值说　明　书 1/14 页 3 CN 115029269 A 3