(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210745714.X (22)申请日 2022.06.28 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M20 3078 2003.11.17 (71)申请人 湖北真福医药有限公司 地址 436070 湖北省鄂州市葛店开发区建 设大道216号东湖高新智慧城一期1、 2 栋 (72)发明人 王业富　何瑜林　董艳山　 (74)专利代理 机构 北京中济纬天专利代理有限 公司 11429 专利代理师 邓佳 (51)Int.Cl. C12N 9/56(2006.01) C12N 1/20(2006.01)A23L 33/195(2016.01) A61K 38/48(2006.01) A61P 9/00(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 一种保护血管内皮的组合物及其制备方法 和应用 (57)摘要 本发明提出了一种保护血管内皮的组合物 及其制备方法和应用， 属于生物工程技术领域。 所述组合物中含有枯草芽孢杆菌纤溶酶， 所述枯 草芽孢杆菌纤溶酶由菌种Bacillus  subtilis   QK02发酵制得， 所述菌种保藏于中国典型培养物 保藏中心， 其保藏编号为CCTCC  NO:M203078。 本 发明提供了一种保护血管内皮的组合物， 利用药 食同源黄芪、 葛根、 丹参与具有功效作用的保护 血管内皮的组合物作为原料， 原料安全， 无毒无 害， 制备成本低。 权利要求书1页 说明书7页 附图3页 CN 114891771 A 2022.08.12 CN 114891771 A 1.一种保护血管内皮的组合物， 其特征在于， 所述组合物中含有枯草芽孢杆菌纤溶酶， 所述枯草芽孢杆菌纤溶酶由菌种Bacillus  subtilis  QK02发酵制得， 所述菌种保藏于中国 典型培养物保藏中心， 其保藏编号 为CCTCC NO:M 203078。 2.根据权利要求1所述保护血管内皮的组合物， 其特征在于， 所述枯草芽孢杆菌纤溶酶 的制备方法如下： S1.培养基的制备： 将 无水葡萄糖， 脱脂大豆粉， Na2HPO4·12H2O， NaH2PO4·H2O， MgSO4· 7H2O， CaCl2， 原料与水按照一定比例配比后在发酵 罐中灭菌； S2.枯草芽孢杆菌纤溶酶的制备： 将培养基冷却后加入发酵罐内， 接种保藏号为CCTCC   NO： M 203078的枯草芽孢杆菌种子液， 于发酵设备中发酵； 所述接种Bacillus  subtilis   QK02菌种， 发酵后的发酵液经过离心去除菌体， 收集上清液， 超滤浓缩， 浓缩液进行喷雾干 燥， 得到枯 草芽孢杆菌纤溶酶粉末。 3.根据权利要求1所述保护血管内皮的组合物， 其特征在于， 由以下原料制备而成： 枯 草芽孢杆菌纤溶酶， 黄芪提取物粉， 葛根 提取物粉， 丹参 提取物粉。 4.根据权利要求1所述保护血管内皮的组合物， 其特征在于， 由以下原料按重量份制备 而成： 枯草芽孢杆菌纤溶酶35 ‑45份， 黄芪提取物粉20 ‑35份， 葛根提取物粉10 ‑25份， 丹参提 取物粉10 ‑20份。 5.根据权利要求3或4所述保护血管内皮的组合物， 其特征在于， 所述黄芪提取物粉的 制备方法具体包括以下步骤： 取黄芪原料， 加入8 ‑12倍重量的水， 80 ‑105℃提取1 ‑3次， 每次 提取时间2 ‑4小时， 提取液过滤， 合并， 加入4 ‑8倍的70％ ‑90％的乙醇， 于60 ‑80℃下回流提 取1‑3h， 提取2 ‑3次； 趁热抽滤， 合并滤液， 减压浓缩 得到无醇味浸膏， 经过干燥处理， 得到黄 芪提取物粉。 6.根据权利要求3或4所述保护血管内皮的组合物， 其特征在于， 所述葛根提取物粉的 制备方法具体包括以下步骤： 取葛根原料， 加入8 ‑15倍重量的50％ ‑90％的乙醇， 70 ‑100℃ 提取1‑3次， 每次提取时间1 ‑6小时， 提取液过滤， 合并， 减压浓缩得到无醇味浸膏， 经过干燥 处理， 得到葛根 提取物粉。 7.根据权利要求3或4所述保护血管内皮的组合物， 其特征在于， 所述丹参提取物粉的 制备方法具体包括以下步骤： 取丹参原料， 加入2 ‑10倍重量的水， 60 ‑100℃提取2 ‑6次， 每次 提取时间0.5 ‑2小时， 提取液过滤， 合并浓缩， 得到丹参提取浓缩液， 将丹参提取浓缩 液经过 干燥处理， 得到丹参 提取物粉。 8.一种如权利要求1 ‑7任一项所述保护血管内皮的组合物的制备方法， 其特征在于， 包 括以下步骤： 将枯草芽孢杆菌纤溶酶、 黄芪提取物粉、 葛根提取物粉、 丹参提取物粉按比例 混合， 即得 所述保护血 管内皮的组合物。 9.一种如权利要求1 ‑7任一项所述保护血管内皮的组合物在制备血管内皮保护功效的 保健食品及药品中的应用。 10.一种枯草芽孢杆菌Bacillus  subtilis  QK02菌种， 其特征在于， 所述菌种保藏于中 国典型培 养物保藏中心， 其保藏编号 为CCTCC NO:M 203078。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891771 A 2一种保护血 管内皮的组合物及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物工程技术领域， 具体涉及 一种保护血管内皮的组合物及其制备方 法和应用。 背景技术 [0002]血管内皮是一类具有重要功能的细胞群， 可分泌大量生物活性物质， 广泛参与血 管收缩与舒张， 血小板功能的调节， 血液抗凝与促凝等复杂的生理病理过程。 血管内皮细胞 (vascular  endothelial cells,VECs)可调节血管张力， 维持正 常的血液流动， 维持血管稳 态。 VECs受到某些因素如高血压、 糖尿病、 高血脂等的刺激而发生损伤后， 会引起VECs功能 发生改变及渗透性升高， 导致血液中脂质在内皮下沉积。 VECs损伤是诸多心脑血管疾病的 始动因素， 单核细胞会在受损的血管内皮细胞处粘附， 并深入到内皮下吞噬沉积的脂质颗 粒， 成为泡沫细胞， 进而形成早期动脉粥样硬化(AS)脂肪斑块。 因此， 保护VECs成为防治心 脑血管疾病的一种有效策略。 [0003]枯草芽孢杆菌纤溶酶是一种安全有效、 成本低廉、 可用于防治心血管疾病的纯天 然蛋白酶。 可降低血粘度， 改善血液循环， 软化和增加血管弹性等作用从而间接保护血管内 皮。 目前还没有以枯草芽孢杆菌纤溶酶为主要成分， 且搭配合理， 效果好的组合物应用于血 管内皮保护的保健品领域的报道。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提出一种保护血管内皮的组合物及其制备方法和应用， 利用药 食同源黄芪、 葛根、 丹参与具有功效作用的保护血管内皮的组合物作为原料， 原料安全， 无 毒无害， 制备成本低； 同时将保护血管内皮的组合物与具有补气活血功效的黄芪、 葛根、 丹 参进行复配， 具有显著的协同作用。 [0005]本发明的技 术方案是这样实现的： [0006]本发明提供一种保护血管内皮的组合物， 所述组合物中含有枯草芽孢杆菌纤溶 酶， 所述枯草芽孢杆菌纤溶酶由菌种Bacillus  subtilis  QK02发酵制得， 所述菌种保藏于 中国典型培 养物保藏中心， 其保藏编号 为CCTCC NO:M 203078。 [0007]作为本发明的进一 步改进， 所述 枯草芽孢杆菌纤溶酶的制备 方法如下： [0008]S1.培养基的制备： 将无水葡萄糖， 脱脂大豆粉， Na2HPO4·12H2O， NaH2PO4·H2O， MgSO4·7H2O， CaCl2， 原料与水按照一定比例配比后在发酵 罐中灭菌； [0009]S2.枯草芽孢杆菌纤溶酶的制备： 将培养基冷却后加入发酵罐内， 接种保藏号为 CCTCC NO： M 203078的枯草芽孢杆菌种子液， 于发酵设备中发酵； 所述接种Bacillus   subtilis  QK02菌种， 发酵后的发酵液经过离心去除菌体， 收集上清液， 超 滤浓缩， 浓缩 液进 行喷雾干燥， 得到枯 草芽孢杆菌纤溶酶粉末。 [0010]作为本发明的进一步改进， 由以下原料制备而成： 枯草芽孢杆菌纤溶酶， 黄芪提取 物粉， 葛根 提取物粉， 丹参 提取物粉。说　明　书 1/7 页 3 CN 114891771 A 3