(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210971149.9 (22)申请日 2022.08.15 (71)申请人 源民生物科技 （山 东） 有限公司 地址 261000 山东省潍坊市高新区健康东 街以南高新二路以东研发中心 （生物 医药科技产业园G座3 06-10室） (72)发明人 张雪松　李华文　范雅彬　付鹏飞　 梁立贺　 (74)专利代理 机构 山东华君知识产权代理有限 公司 373 00 专利代理师 李欣 (51)Int.Cl. A23L 33/135(2016.01) A23L 33/16(2016.01) C12N 1/20(2006.01)C12N 1/04(2006.01) C12R 1/25(2006.01) C12R 1/225(2006.01) C12R 1/23(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种具有增肌护骨功能的益 生菌群组合物 (57)摘要 本发明公开了一种具有增肌护骨功能的益 生菌群组合物， 属于益生菌群组合物技术领域， 所述益生菌群组合物， 按重量份计， 由以下成分 组成： 85‑90份负载菌粉， 4 ‑6份辅料， 6 ‑9份改性 钙； 所述负载菌粉的制备方法， 由以下步骤组成： 制备种子液、 制备发酵液、 制备冻干保护剂、 干 燥、 负载； 所述具有增肌护骨功能的益生菌群组 合物的制备方法， 将负载菌粉、 辅料、 改性钙混合 均匀后进行真空冷冻干燥， 得到具有增肌护骨功 能的益生菌群组合物； 本发明的益生菌群组合 物， 能够在提高增肌护骨效果， 避免长期使用导 致对益生菌产生依赖， 保证钙与益生菌能够一起 使用的同时， 提高益 生菌群组合物中的活菌数。 权利要求书2页 说明书10页 CN 115039887 A 2022.09.13 CN 115039887 A 1.一种具有增肌护骨功能的益生菌群组合物， 其特征在于， 按重量份计， 由以下成分组 成： 85‑90份负载菌粉， 4 ‑6份辅料， 6 ‑9份改性钙； 所述负载菌粉的制备方法， 由以下步骤组成： 制备种子液、 制备发酵液、 制备冻干保护 剂、 干燥、 负载； 所述制备冻干保护剂的方法为： 将蔗糖、 β ‑葡聚糖、 海藻多糖、 氯化钠、 麦芽糊精、 脱脂 奶粉混合后进行球磨， 控制球磨时的球料比为8 ‑10:1， 球磨转速为350 ‑380rpm， 球磨时间为 30‑35min， 球磨结束 得到初级冻干保护剂， 将初 级冻干保护剂、 卡拉胶、 聚甘油脂肪酸酯、 预 糊化淀粉混合均匀后进行低频超声处理， 控制低频超声处理的频率为22 ‑25kHz， 功率为 380‑400W， 低频超声处 理结束， 得到冻干保护剂； 所述制备冻干保护剂中， 蔗糖、 β ‑葡聚糖、 海藻多糖、 氯化钠、 麦芽糊精、 脱脂奶粉 的重 量比为10 ‑12:3‑5:2‑4:0.5‑1:1‑3:2.5‑4； 所述制备冻干保护剂中， 初级冻干保护剂、 卡拉胶、 聚甘油脂肪酸酯、 预糊化淀粉的重 量比为18 ‑20:4‑6:1‑3:2‑4； 所述干燥的方法为： 将发酵液进行离心分离， 控制离心分离时的转速为2800 ‑3000rpm， 时间为5‑6min， 离心分离结束后得到的固相物作为菌泥， 将菌泥和冻干保护剂以重量比为 90‑92:6‑8混合均匀后， 进行真空冷冻干燥处理， 控制真空冷冻干燥处理的温度为 ‑35℃至‑ 32℃， 真空度为80 0‑900Pa， 处理时间为5 0‑55min， 真空冷冻干燥结束得到 菌粉； 所述负载的方法为： 将抗性糊精、 焦磷酸铁、 磷酸三钙、 聚乙烯吡咯烷酮混合后进行微 波震荡， 控制微波震荡的强度为60 ‑80W， 微波震荡的时间为20 ‑25min， 微波震荡结束 得到载 体， 将载体与菌粉加入反应容器中， 在12 ‑15℃下以80 ‑100rpm的搅拌速度搅拌20 ‑25min， 得 到负载菌粉； 所述负载中， 抗性糊精、 焦磷酸铁、 磷酸三钙、 聚乙烯吡咯烷酮的重量比为8 ‑10:3‑5:1‑ 2:2‑4； 所述负载中， 菌粉与载体的重量比为7 ‑8:10； 所述负载菌粉中的益 生菌的总数量 为2.2×1010‑2.5×1010cfu/g； 所述辅料的组成， 按重量份计， 包括： 10 ‑13份羧甲基纤维素钠， 3 ‑5份酪朊酸钠， 1 ‑3份 脂肪酸蔗糖聚酯， 2 ‑5份葡萄糖； 所述改性钙的制备方法， 具体为： 将葡萄糖酸钙、 醋酸钙、 乳酸钙加入球磨机中进行球 磨， 控制球磨时的球料比为15 ‑18:1， 球磨转速为300 ‑320rpm， 球磨时间为35 ‑40min， 球磨结 束得到混合钙， 将混合钙、 低酯果胶、 玉米淀粉、 麦芽糖、 丙二醇脂肪酸酯、 去离子水混合均 匀后进行真空喷雾干燥， 控制真空喷雾干燥过程中的真空度为500 ‑600Pa， 进口温度为130 ‑ 135℃， 出口温度为65 ‑70℃， 真空喷雾干燥结束 得到初级改性钙， 对初级改性钙进 行液氮喷 淋， 控制液氮喷淋的出口压力为0.4 ‑0.5MPa， 喷淋速度为3 ‑3.5m/s， 工作频率为35 ‑40Hz， 喷 淋时间为12 ‑15s， 液氮喷淋结束后， 自然恢复至室温， 得到改性钙； 所述改性钙的制备中， 葡萄糖酸钙、 醋酸钙、 乳酸钙的重量比为7 ‑8:3‑5:2‑4； 所述改性钙的制备中， 混合钙、 低酯果胶、 玉米淀粉、 麦芽糖、 丙二醇脂肪酸酯、 去离子 水的重量比为18 ‑20:5‑7:4‑6:1‑2:0.2‑0.5:48‑50。 2.根据权利要求1所述的具有增肌护骨功能的益生菌群组合物， 其特征在于， 所示制备 种子液的方法为： 分别将冷冻保存的植物乳杆菌、 鼠李糖乳杆菌、 副干酪乳杆菌、 嗜酸乳杆权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115039887 A 2菌、 长双歧杆菌在固体LB平板上划线进行活化， 然后 分别从LB平板中挑选单菌落接种于装 有100mL液体培养基的250mL锥形瓶中， 将250mL锥形瓶放入摇床进行摇床 培养， 控制摇床 培 养的温度为36 ‑38℃， 转速为220 ‑250rpm， 时间为14 ‑15h， 摇床培养结束后分别得到植物乳 杆菌种子液、 鼠李糖乳杆菌种子液、 副干酪乳杆菌种子液、 嗜酸乳杆菌种子液、 长双 歧杆菌 种子液。 3.根据权利要求1所述的具有增肌护骨功能的益生菌群组合物， 其特征在于， 所述制备 发酵液的方法为： 分别将植物乳杆菌种子液、 鼠李糖乳杆菌种子液、 副干酪乳杆菌种子液、 嗜酸乳杆菌种子液、 长双歧杆菌种子液依次接种于同一MRS液体培养基中， 控制植物乳杆菌 的接种量为1.5 ‑2%， 鼠李糖乳杆菌的接种量为1 ‑1.5%， 副干酪乳杆菌的接种量为1.5 ‑2%， 嗜 酸乳杆菌的接种量为0.5 ‑1%， 长双歧杆菌的接种量为1 ‑2%， 接种完成后进行搅拌发酵培养， 控制搅拌发酵培养的温度为36 ‑38℃， 转速为320 ‑350rpm， 通气量为1.5 ‑2vvm， 时间为17 ‑ 18h， 搅拌发酵培 养结束得到发酵 液； 所述MRS液体培养基， 由以下成分组成： 6 ‑7g/L胰蛋白胨， 5 ‑6g/L葡萄糖， 4 ‑6g/L牛肉 膏， 3‑5g/L酵母膏， 1.5 ‑2g/L柠檬酸钠， 0.5 ‑1g/L吐温80， 0.2 ‑0.5g/L硫酸锰， 0.1 ‑0.15g/L 鼠李糖脂， 剩余 为去离子水。 4.根据权利要求1所述的具有增肌护骨功能的益生菌群组合物， 其特征在于， 所述具有 增肌护骨功能的益生菌群组合物的制备方法， 将负载菌粉、 辅料、 改性钙混合均匀后进行真 空冷冻干燥， 控制真空冷冻 干燥处理的温度为 ‑35℃至‑30℃， 真空度为700 ‑800Pa， 处理时 间为40‑45min， 真空冷冻干燥结束得到具有增肌护骨功能的益 生菌群组合物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115039887 A 3