(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210681307.7 (22)申请日 2022.06.15 (71)申请人 广州希望饲料有限公司 地址 510000 广东省广州市南沙区广珠东 线26号 (72)发明人 刘建高　李忠良　焦莉　钟玉鸣　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 方燕　刘明星 (51)Int.Cl. A23K 50/75(2016.01) A23K 50/70(2016.01) A23K 10/30(2016.01) A23K 10/37(2016.01) C12N 1/12(2006.01)C12N 1/20(2006.01) C12R 1/89(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种具有改善水禽免疫力与肠道的无抗饲 料添加剂及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种具有改善水禽免疫力与 肠道的无抗饲料添加剂及其制备方法。 该饲料添 加剂的制备方法， 包括如下步骤： S1、 将微藻藻种 接种于A0培养基中， 使用光照培养， 当藻液的光 密度值OD达到600 ‑700后， 离心将微藻均分成三 份进行培养； S2、 将步骤S1得到的微藻进行藻蛋 白强化培养， 收获微藻A； S3、 将步骤S1得到的微 藻进行藻脂类强化培养， 收获微藻B； S4、 将步骤 S1得到的微藻进行藻发酵 强化培养， 得到微藻C； S5、 将微藻A、 微藻B和微藻C分别进行干燥， 混合， 得到无抗饲料添加剂。 本发明利用微藻功能成分 得到的饲料添加剂配方具有定向改善水禽肠道 功能、 肠道菌群的组成， 代替抗生素的功能， 可以 有效减少饲料的使用与营造水禽养殖的健康养 殖环境。 权利要求书2页 说明书10页 附图5页 CN 115024428 A 2022.09.09 CN 115024428 A 1.一种具有改善水禽免疫力与肠道的无抗饲料添加剂的制备方法， 其特征在于， 包括 如下步骤： S1、 微藻的预培养： 将微藻藻种经无菌操作接种于灭过菌的A0培养基中， 使用光照培 养， 当藻液的光密度值OD达 到600‑700后， 离心将微藻均分成三份进行培 养； S2、 藻蛋白强化培养： 将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基， 然后使用光照培养， 测 定氨氮去除率、 总氮去除率分别为90％以上和70％以上时， 离心后， 将藻体转入A1培养基， 再培养2‑4天后， 收获微藻A； S3、 藻脂类强化培养： 将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基， 然后使用光照培养， 测 定氨氮去除率、 总氮去除率分别为90％以上和70％以上时， 离心后， 将藻体转入A2培养基， 采用无光 ‑有光交替培 养， 培养5‑7天后， 收获微藻B； S4、 藻发酵强化培养： 将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基， 然后使用光照培养， 测 定氨氮去除率、 总氮去除率分别为90％以上和70％以上， 离心后， 将藻体转入A3培养基， 进 行发酵培 养， 测定生物量增 加至200‑350mg/L， 再培 养24‑48h， 得到微藻C； S5、 饲料添加剂配制： 将步骤S2、 S3和S4得到 的微藻A、 微藻B和微藻C分别进行干燥， 混 合， 得到无抗饲料 添加剂。 2.根据权利要求1所述的制备 方法， 其特 征在于， 具体包括如下步骤： S1、 微藻的预培养： 将微藻藻种经无菌操作接种于灭过菌的A0培养基中， 然后使用光照 培养， 当藻液的光密度值OD达 到600‑700后， 离心将微藻均分成三份进行培 养； A0培养基成分为： NH4Cl 600mg/L， KH2PO470 mg/L， K2HPO4 88mg/L， MgSO47H2O 80mg/L， CaCl2 50mg/L， 水10 00mL， pH 7‑8； S2、 藻蛋白强化培养： 将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基， 然后使用光照培养， 每 天震荡3‑4次， 培养温度为20℃ ‑30℃， 光照强度为4500 ‑6000Lux， 培养4 ‑6天， 测定氨氮去除 率、 总氮去除率分别为90％以上和70％以上时， 离心后， 将藻体转入A1培养基， 再培养2 ‑4天 后， 测定氨 氮去除率、 总氮去除率分别为90％以上和70％以上， 收获微藻A； A1培养基成分为： 改性的铁皮石斛粉末50 ‑100mg/L， NH4Cl 700mg/L， KH2PO4 60mg/L， K2HPO4 100mg/L， MgSO47H2O 80mg/L， CaCl2 50mg/L， 水10 00mL， pH 7‑8； S3、 藻脂类强化培养： 将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基， 然后使用光照培养， 每 天震荡3‑4次， 培养温度为20 ‑30℃， 光照强度为4500 ‑6000Lux， 培养2 ‑4天， 测定氨氮去除 率、 总氮去除率分别为90％以上和70％以上时， 离心后， 将藻体转入A2培养基， 采用无光 ‑有 光交替培养， 有光培养条件为： 培养温度20℃ ‑30℃， 光照强度6000 ‑7000Lux， 培养18 ‑30h， 震荡培养； 无光培养条件为： 150rpm震荡培养， 每隔18 ‑30h更换一次光线的开关， 并在暗培 养时加入脉冲超声波培养， 在超声下培养10 ‑20min， 每天1 ‑2次， 培养5 ‑7天后， 收获微藻B； A2培养基成分为： 板栗壳 ‑改性高岭土100 ‑200mg/L， NaNO3 100‑200mg/L， KH2PO4 60mg/L， K2HPO4 100mg/L， MgSO47H2O 80mg/L， CaCl2 50mg/L， 水10 00mL， pH 7‑8； S4、 藻发酵强化培养： 将步骤S1得到的一份微藻加入A0培养基， 然后使用光照培养， 每 天震荡3‑4次， 培养温度为20℃ ‑30℃， 光照强度为4500 ‑6000Lux， 培养2 ‑4天， 测定氨氮去除 率、 总氮去除率分别为90％以上和70％以上， 离心后， 将藻体转入A3培养基， 进行发酵培养， 培养条件为： 避光， 150rpm震荡培养， 培养24 ‑48h后， 测定生物量增加至200 ‑350mg/L， 再培 养24‑48h， 得到微藻C；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115024428 A 2A3培养基成分为： 葡萄糖100 ‑200mg/L， 海藻酸钠100 ‑150mg/L， NH4Cl 100‑200mg/L， KH2PO4 60mg/L， K2HPO4100 mg/L， MgSO47H2O 80mg/L， CaCl2 50mg/L， 水10 00mL， pH 7‑8； S5、 饲料添加剂配制： 将步骤S2、 S3和S4得到 的微藻A、 微藻B和微藻C分别进行干燥， 离 心后， 55℃ ‑60℃烘干， 按照微藻A、 微 藻B和微藻C的质量比为50 ‑60： 25‑35： 20‑30进行混合， 得到无抗饲料 添加剂。 3.根据权利要求1或2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S1所述的微藻选自小球藻、 栅 藻和螺旋藻中的一种。 4.根据权利要求1或2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S2所述的改性铁皮石斛粉末 具体由如下步骤得到： 将石斛粉末烘干至恒重后 磨粉， 过60 ‑80目筛， 加入 无水乙醇， 缓慢加 入去离子水， 去除上清液， 烘干 至恒重， 获得改性铁皮石斛粉末。 5.根据权利要求1或2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S1所述的光照培养条件为： 每 天震荡3‑4次， 培养温度为20℃ ‑30℃， 光照强度为3 000‑4500Lux， 培养5‑7天。 6.根据权利要求1或2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤S3所述的板栗壳 ‑改性高岭土 采用如下步骤制备： 将偏高岭土、 氧化钙、 硅酸钠和板栗壳均匀混合后得到混合粉末， 按混 合粉末与水的质量比为8 ‑12： 1的量加入水粘合后， 烘干， 再进行煅烧， 冷却过筛， 得到板栗 壳‑改性高岭土 。 7.根据权利 要求1或2所述的制备方法， 其特征在于， 还包括步骤S6、 对步骤S5得到的无 抗饲料添加剂进 行超微粉碎， 得到微藻粉； 将载体与微藻粉混合， 载体选自脱脂米糠、 麸皮、 砻糠和玉米芯粉的一种以上， 载体与微藻粉的质量比为3 ‑5： 2‑3。 8.权利要求1所述的制备 方法得到的具有改善水禽免疫力与肠道的无抗饲料 添加剂。 9.权利要求8所述的无抗饲料 添加剂在改善水禽免疫力与肠道中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 是将权利要求9所述的无抗饲料添加剂以 质量分数0.5％ ‑2％的比例加入到水禽基础日粮中。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115024428 A 3