(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210659410.1 (22)申请日 2022.06.13 (71)申请人 东北农业大 学 地址 150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区长 江路600号 (72)发明人 孟祥晨　张晓桐　陈禹含　尚佳萃　 杨硕　 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) C12Q 1/02(2006.01) G01N 33/92(2006.01) A23C 9/13(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其 制备方法 (57)摘要 本发明开发一种具有缓解便秘功效的合生 元酸奶及其制备方法。 以酸奶质构特性和感官评 价得分为指标， 确定菊粉添加量6.1％、 蔗糖添加 量6.8％、 双歧杆菌接种量5.5％、 酸奶发酵剂用 量0.003％、 发酵时间6.1h， 最终制备的酸奶中 H3‑R2活菌数为5 ×107CFU/mL。 使用便秘模型小 鼠评价酸奶缓解便秘的效果。 研究酸奶对小鼠健 康指数、 粪便含水量、 小肠推进 率、 血清中胃肠调 节肽和炎症因子水平、 结肠组织状态、 粪便中短 链脂肪酸含量以及肠道菌群的影响。 结果显示， 小鼠便秘症状明显缓解。 联合使用两歧双歧杆菌 H3‑R2和菊粉开发出一种对便秘 具有明显缓解作 用的合生元酸奶， 能够有效改善便秘症状， 缓解 便秘导致的粪便干硬、 排便时间延长等症状， 减 轻肠道炎症反应 。 权利要求书2页 说明书7页 附图4页 CN 115011516 A 2022.09.06 CN 115011516 A 1.一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征在于， 该方法包括以下 步骤： (1)合生元酸奶的制备： 在蒸馏水中加入6.8％蔗糖、 6.1％菊粉和12％脱脂奶粉搅拌 至完全溶解， 分装至玻璃瓶中灭菌， 冷却 至室温后接种0.003％发酵剂和 5.5％已活化的双 歧杆菌， 混合均匀后密封， 置于42℃恒温培养箱中发酵6h， pH达到4.6左右时停止发酵， 转移 至4℃冰箱后熟24h。 (2)测定酸奶中活菌数并对其进行感官评价。 (3)评价酸奶对便秘模型 小鼠的效果： 全程灌胃生理盐水的BA LB/c雄鼠作为正常对照组(NC)， 灌胃2周生理盐水后再 灌胃5mg/kg洛哌丁胺3天的小鼠作为便秘模 型组(CM)， 灌胃2周酚酞后再灌胃5mg/kg洛哌丁 胺3天的小鼠作为阳性药物组(PC)， 含菊粉的酸奶代替酚酞组(IY)、 两歧双歧杆菌H3 ‑R2的 酸奶代替酚酞组(RY)以及两者都使用的酸奶代替酚酞组(RI)作为实验组， 对小鼠健康指 数、 粪便含水量、 小肠推进率、 血清中 胃肠调节肽和炎症因子水平、 结肠组织状态、 粪便中短 链脂肪酸含量进行测定， 分析其肠道菌群组成。 2.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征 在于， 酸奶活菌数及感官特性为： 最终制备 的酸奶中H3 ‑R2活菌数为5 ×107CFU/mL， 产品色 泽均匀一 致， 口感细腻顺滑， 酸 甜适中， 无不良风味。 3.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征 在于， 所述的小鼠健康状况为： 各组小鼠的摄食量在适应期迅速增长， 干预期 Ⅰ开始灌胃酸 奶后， RY组和RI组的摄食量呈先下降后缓慢上升的趋势， 其余实验组总体呈现先上升后下 降的趋势， PC组和IY组的变化趋势十分相近； 干预期 Ⅱ只有灌胃生理盐水的NC组的小鼠摄 食量在继续增长， 其他 实验组灌胃洛哌丁胺后， 小鼠的摄食量均降低； RI组的脏器指数相比 于CM组均有所升高， 接 近于NC组。 4.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征 在于， 所述的小鼠粪便含 水量为： 干预期最后一 天CM组粪便含水量显著低于NC组； 各实验组 中， RI组粪便含 水量最高， 其余实验组的粪便含 水量由高到低依次是P C组、 IY组、 RI组、 RY组 和CM组。 5.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征 在于， 所述的小鼠小肠推进率为： NC组的小肠推进率为77.21％ ±1.45％， CM组的小肠推进 率较NC组显著降低， 为49.86％ ±2.35％； 与CM组相比， 四个实验组均能显著提高小肠推进 率， 能起到提升小肠推进力的作用， 其中RI组作用最明显， 小肠推进力接 近于NC组。 6.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征 在于， 所述的小鼠血清 中胃肠调节肽变化为： 与NC组相比， CM组小鼠血清中Gas和SP的含量 显著降低， SS含量则显著升高。 相较于CM组， 其他四个实验组均可不同程度的增加Gas和SP 的含量， 降低VIP和SS的含量； 其中RY组对 四种胃肠调节肽均起到了调节作用， IY组只显著 降低了VIP含量； RI组既显著提高了Gas含量， 又显著降低了VIP和SS的含量， 相比于IY组和 RY组， RI组对胃肠调节肽含量的影响最显著。 7.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征 在于， 所述的小鼠血清中炎症因子的变化： 相较于NC组， CM组小鼠血清中TNF ‑α、 IL‑1β 、 IL‑6 含量显著降低， IL ‑10含量显著升高； 与CM组相比， PC组和RY组都显著降低了TNF ‑α和IL‑1β 的含量， IY组IL ‑1β 含量明显下降， 而RI组TNF ‑α、 IL‑1β 、 IL‑6三种促炎因子的含量均显著下 降。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115011516 A 28.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征 在于， 所述的结肠组织变化为： 所有组小鼠结肠组织的上皮层、 固有层、 黏膜肌层与黏膜下 层结构都比较完整； 相较于NC组， CM组小鼠结肠组织层较薄， 杯状细胞明显减少， 大量淋巴 细胞聚集， 多处出现炎症浸润现象； IY组结肠组织层较薄， 有淋巴因子聚集的情况。 PC组与 RI组组织层较厚， 接 近于NC组， 杯状细胞 结构清晰且数量较多， 少有炎症浸润的发生。 9.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征 在于， 所述的粪便中短链脂肪酸含量为： 与NC组相比， CM组小鼠粪便中乙酸、 丙酸和丁酸的 含量显著降低， 戊酸的含量显著增加； CM组小鼠粪便中乙酸含量为1.25 ±0.13g/kg， RI组、 RY组和IY组的乙酸含量显著上升， 分别为1.44 ±0.13g/kg、 1.51 ±0.02g/kg和1.45 ± 0.09g/kg； RI组、 RY组和PC组中丙酸含量相较于CM组明显提升； 与CM组相比， RI组和RY组丁 酸水平显著升高； PC组、 IY组和RY组的戊酸含量相比于 CM组明显下降。 10.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘功效的合生元酸奶及其制备方法， 其特征 在于， 所述的肠 道菌群组成变化为： CM组小鼠肠道菌群的Chao ‑1指数、 Observed  species指 数和Shannon指数相较于NC组显著降低， 其他实验组的3种指数均有所增加， 其中RI组最接 近于NC组； NC组小鼠的肠道菌群主要由厚壁菌门 (Firmicutes)和拟杆菌门 (Bacteroi detes)组成， 合计占比在95％以上； CM组经洛哌丁胺处理， 厚壁菌门丰度显著下 降， 拟杆菌门丰度显著升高， 厚壁菌门/拟杆菌门(F/B)比值减小， 其他各实验组的F/B比值 均高于CM组， 其中RY组与RI组在门水平上的菌群结构更接近于NC组； 与NC组相比， CM组小鼠 肠道菌群中拟杆菌属(Bacteroides)、 Lachnospiraceae.NK4A136_group、 L.UCG ‑08明显降 低， 而CM组罗斯氏菌属(Rosebur ia)的相对丰度增加， 四个实验组均改善了洛哌丁胺引起的 拟杆菌属的丰度降低， 其中IY组梭菌属(Clostridia_UCG ‑014)和阿克曼氏菌属 (Akkermansia)的相对丰度显著增加， RI组中Muribaculaceae、 另枝菌属(Alistipes)和阿 克曼氏菌属等有益菌属的相对丰度明显增 加。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115011516 A 3