(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210780503.X (22)申请日 2022.07.05 (71)申请人 广州微立旺生物科技有限公司 地址 510000 广东省广州市高新 技术产业 开发区科学大道118-120号(B1栋)604 房 (72)发明人 易鹏飞　易清　王庆红　 (74)专利代理 机构 东莞市凯粤智华专利商标代 理事务所(普通 合伙) 44698 专利代理师 罗丽 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/02(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C12R 1/125(2006.01)C12R 1/085(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C02F 101/16(2006.01) (54)发明名称 一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌及 筛选分离方法 (57)摘要 本发明公开了一种具有降解亚硝酸盐能力 的芽孢杆菌及筛选分离方法， 属于芽孢杆菌领 域。 一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌， 包 括按照重量份数配制的以下组分： 固态培养基30 ～50份、 芽孢杆菌液10～15份、 枯草芽孢杆菌液 15～20份、 好氧反硝化菌液10～15份、 蜡状芽孢 杆菌液10～15份、 解淀粉芽孢杆15～20份， 所述 固态培养基的制备方法包括以下步骤： 1） 原料： 牛肉膏粉3～ 6份， 胰酪蛋白胨10～2 0份， 氯化钠4 ～8份， 琼脂15～30份， 纯净水700～1500mL； 2） 制 法： 将纯净水700～1500mL加热至40～50℃。 本发 明能够提升菌种的繁殖能够力， 从而提高降解亚 硝酸盐的能力。 权利要求书1页 说明书5页 CN 114934003 A 2022.08.23 CN 114934003 A 1.一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌， 其特征在于， 包括按照重量份数配制的以 下组分： 固态培养基30～50份、 芽孢杆菌液10～ 15份、 枯草芽孢杆菌液15～20份、 好氧反硝化菌 液10～15份、 蜡状芽孢杆菌液10～15份、 解淀粉芽孢杆15～ 20份。 2.根据权利要求1所述的一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌， 其特征在于： 所述固 态培养基的制备 方法包括以下步骤： 1） 原料： 牛肉膏粉3～6份， 胰酪蛋白胨10～20份， 氯化钠4～8份， 琼脂15～30份， 纯净水 700～1500mL； 2） 制法： 将纯净水700～1500mL加热至40～50℃， 然后将牛肉膏粉3～6份， 胰酪蛋白胨 10～20份和氯化钠4～8份加入至纯净水700～1500mL中， 并进行充分搅拌， 使得原料溶解于 纯净水中制成混合液； 3） 将混合液冷却至20～30℃， 将琼脂15～30份添加至混合液中， 并进行加热搅拌， 直至 琼脂15～3 0份与混合液充分 混合后， 静置冷却， 形成固态培 养基。 3.根据权利要求1所述的一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌， 其特征在于： 其制备 方法包括以下步骤： 1） 将芽孢杆菌液10～15份、 枯草芽孢杆菌液15～20份、 好氧反硝化菌液10～15份， 蜡状 芽孢杆菌液10～15份以及解淀粉芽孢杆15～ 20份混合， 得到 菌种混合液； 2） 将固态培养基30～50份与菌种混合液40～60份均匀混合， 然后放置在发酵瓶中， 并 以30～35℃发酵7～9天， 得到发酵菌液； 3） 将辅料5～8份与发酵菌液40～60份均匀 混合， 并以35～45℃烘干， 得到具有降解亚 硝酸盐能力的芽孢杆菌 。 4.根据权利要求3所述的一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌， 其特征在于： 所述辅 料由米糠10～15份、 糖20～ 25份、 石膏1～8份、 熟石灰8～10份和饼肥5～8份混合制成。 5.一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌的筛选分离方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： S1、 将具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌10～30份添加至牛肉膏蛋白胨液体20～40份 培养基中， 并充分搅拌均匀， 并混合液放置在培 养箱中， 以3 0～37℃培 养24～48h； S2、 吸取混合液1～3ml于8～14ml无菌水中制成菌悬液， 将菌悬液滴在固体培养基上， 涂布均匀， 放进摇床培 养箱中以3 0～37℃培 养24～48h； S3、 挑取较大 单菌落于液体培 养基中分离纯化。 6.根据权利要求5所述的一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌的筛选分离方法， 其 特征在于： 所述牛肉膏蛋白胨液体培养基由牛肉膏10～30份、 蛋白胨20～40份、 氯化钾1～8 份以及蒸馏水6 0～80份混合制成。 7.根据权利要求5所述的一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌的筛选分离方法， 其 特征在于： 所述液体培养基由胰蛋白陈3～6份、 酵母膏8～9份、 琼脂8～10份、 双 蒸馏水30～ 50份和氯化钠20～3 0份混合制成。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114934003 A 2一种具有降解亚硝酸盐能力的 芽孢杆菌及筛选分离方 法 技术领域 [0001]本发明涉及芽孢杆菌领域， 更具体地说， 涉及一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢 杆菌及筛 选分离方法。 背景技术 [0002]芽孢杆菌， 能形成芽孢的杆菌或球菌； 包括芽孢杆菌属、 芽孢乳杆菌属、 梭菌属、 脱 硫肠状菌属和芽孢八叠球菌属等； 它们对外界有害因子抵抗力强， 分布广， 存在于土壤、 水、 空气以及动物肠道等处； 芽孢杆菌为芽孢菌属的种类， 革兰氏染色阳性， 是一类好气性细 菌； 能分泌蛋白酶等多种酶类和抗生素， 其可直接利用硝酸盐和亚硝酸盐， 从而起到净化水 质的作用。 另外还能利用分泌的多种酶类和抗生素来抑制其他细菌的生长， 进而减少甚至 消灭水产养殖动物的病原体， 减少疾病的发生， 提高养殖效益。 能够改善水生动物肠道微生 物区系， 增强动物的消化吸收功能， 促进动物对钙、 磷、 铁的利用， 促进维生素D的吸收， 增强 机体抗病力， 降低饵料系数 现有的芽孢杆菌在降解亚硝酸盐方面的能力较差， 为了能够提高芽孢杆菌降解亚 硝酸盐的能力， 我们提出一种具有降解 亚硝酸盐能力的芽孢杆菌及筛 选分离方法。 发明内容 [0003]1． 要解决的技 术问题 本发明的目的在于提供一种具有降解亚硝酸盐能力的芽孢杆菌及筛选分离方法， 以解决上述背景技 术中提出的问题。 [0004]2.技术方案 一种具有降解 亚硝酸盐能力的芽孢杆菌， 包括按照重量份数配制的以下组分： 固态培养基30～50份、 芽孢 杆菌液10～15份、 枯草芽孢 杆菌液15～20份、 好氧反硝 化菌液10～15份、 蜡状芽孢杆菌液10～15份、 解淀粉芽孢杆15～ 20份。 [0005]进一步的， 所述固态培 养基的制备 方法包括以下步骤： 1） 原料： 牛肉膏粉3～6份， 胰酪蛋白胨10～20份， 氯化钠4～8 份， 琼脂15～30份， 纯 净水700～1500mL； 2） 制法： 将纯净水700～1500mL加热至40～50℃， 然后将牛肉膏粉3～6份， 胰酪蛋 白胨10～20份和氯化钠4～8份加入至纯净水700～1500mL中， 并进行充分搅拌， 使 得原料溶 解于纯净水中制成混合液； 3） 将混合液冷却至20～30℃， 将 琼脂15～30份添加至混合液中， 并进行加热搅拌， 直至琼脂15～3 0份与混合液充分 混合后， 静置冷却， 形成固态培 养基。 [0006]一种具有降解 亚硝酸盐能力的芽孢杆菌的制备 方法包括以下步骤： 1） 将芽孢杆菌液10～15份、 枯草芽孢杆菌液15～20份、 好氧反硝化菌液10～15份， 蜡状芽孢杆菌液10～15份以及解淀粉芽孢杆15～ 20份混合， 得到 菌种混合液； 2） 将固态培养基30～50份与菌种混合液40～60份均匀混合， 然后放置在发酵瓶说　明　书 1/5 页 3 CN 114934003 A 3