(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210637525.0 (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 源民生物科技 （山 东） 有限公司 地址 261000 山东省潍坊市高新区健康东 街以南高新二路以东研发中心 （生物 医药科技产业园G座3 06-10室） (72)发明人 李华文　范雅彬　付鹏飞　梁立贺　 张雪松　关艳平　 (74)专利代理 机构 山东华君知识产权代理有限 公司 373 00 专利代理师 李欣 (51)Int.Cl. A61K 35/745(2015.01) A61K 9/19(2006.01) A61K 47/02(2006.01)A61K 47/18(2006.01) A61K 47/26(2006.01) A61K 47/36(2006.01) C12N 1/20(2006.01) A61P 17/18(2006.01) A61P 37/04(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种具有预防皮肤衰老功能的益生菌群组 合物 (57)摘要 本发明公开了一种具有预防皮肤衰老功能 的益生菌群组合物， 属于益生菌群组合物技术领 域， 所述益生菌群组合物， 按重量份计， 由以下成 分组成： 80‑85份混合菌粉， 4 ‑6份冻干保护剂， 2 ‑ 5份分散剂， 2 ‑4份表面活性剂， 1 ‑3份改性因子， 本发明的益生菌群组合物能够在预防皮肤衰老 的同时， 避免对益生菌产生依赖和对益生菌产生 过敏反应， 并且 可用于免疫力有问题或者消化道 黏膜损坏的人。 权利要求书2页 说明书14页 CN 114712406 A 2022.07.08 CN 114712406 A 1.一种具有预防皮肤衰老功能的益生菌群组合物， 其特征在于， 按重量份计， 由以下成 分组成： 80 ‑85份混合菌粉， 4 ‑6份冻干保护剂， 2 ‑5份分散剂， 2 ‑4份表面活性剂， 1 ‑3份改性 因子； 所述混合菌粉的制备 方法， 由以下步骤组成： 制备种子液、 制备发酵 液、 改性干燥； 所述制备种子液的方法为， 分别将冷冻保存的乳双歧杆菌、 动物双歧杆菌、 青春双歧杆 菌、 长双歧杆菌、 婴儿双歧杆菌、 短双歧杆菌在固体LB平板上划线进行活化， 然后 分别从LB 平板中挑选单菌落接种于装有100mL液体培养基的250mL锥形瓶中， 将250mL锥形瓶放入摇 床进行摇床培养， 控制摇床培养的温度为36 ‑38℃， 转速为220 ‑250rpm， 时间为15 ‑16h， 摇床 培养结束后分别得到乳双歧杆菌种子液、 动物双歧杆菌种子液、 青春双歧杆菌种子液、 长双 歧杆菌种子液、 婴儿双歧杆菌种子液、 短双歧杆菌种子液； 所述制备发酵液的方法为， 分别将乳双歧杆菌种子液、 动物双歧杆菌种子液、 青春双歧 杆菌种子液、 长双歧杆菌种子液、 婴儿双歧杆菌种子液、 短双歧杆菌种子液依次接种于同一 MRS液体培养基中， 控制乳双歧杆菌种子液的接种量为2 ‑3%， 动物双歧杆菌的接种量为1 ‑ 3%， 青春双歧杆菌的接种量为 1‑2%， 长双歧杆菌的接种量为2 ‑4%， 婴儿双歧杆菌的接种量为 1‑2%， 短双歧杆菌的接种量为 1‑3%， 接种完成后进行搅拌发酵培养， 控制搅拌发酵培养的温 度为37‑38℃， 转速为32 0‑350rpm， 通气量为1.5 ‑2vvm， 时间为18 ‑20h， 搅拌发酵培养 结束得 到发酵液； 所述MRS液体培养基， 由以下成分组成： 5 ‑7g/L胰蛋白胨， 4 ‑7g/L葡萄糖， 4 ‑6g/L酵母 膏， 2‑3g/L牛肉膏， 1 ‑3g/L柠檬酸钠， 剩余 为去离子水； 所述改性干燥的方法为， 将发酵液、 壳聚糖、 大豆磷脂混合后在35 ‑40℃下搅拌25 ‑ 30min， 得到改性发酵液， 对改性发酵液进行离心分离， 控制离心分离时的转速为2600 ‑ 2800rpm， 时间为4 ‑5min， 离心分离结束后得到的固相物作为菌泥， 对菌泥进行真空冷冻干 燥处理， 控制真空冷冻干燥处理的温度为 ‑35℃至‑30℃， 真空度为700 ‑900Pa， 处理时间为 45‑50min， 真空冷冻干燥结束 得到初级混合菌粉， 将初 级混合菌粉； 将初 级混合菌粉置于 反 应器中， 将反应器的温度控制到20 ‑25℃， 按照2.5 ‑3L/min的体积流量依次切换通入N2 5‑ 7min、 CO2 10‑13min、 干空气17 ‑20min、 N2 6‑8min进行活化， 活化结束得到混合菌粉； 所述混合菌粉中的益 生菌的总数量 为4.0×1010‑4.5×1010cfu/g； 所述改性干燥中， 发酵 液、 壳聚糖、 大豆磷脂的重量比为 40‑45:3‑5:4‑5； 所述冻干保护剂的制备方法为： 将蔗糖、 麦芽糊精、 谷氨酸钠、 氯化钠混合后置于球磨 机中进行第一次球磨， 控制第一次球磨时的球料比为18 ‑20:1， 转速为300 ‑350rpm， 第一次 球磨时间为40 ‑50min， 第一次球磨结束后进行低温等离子处理， 控制低温等离子处理中的 处理温度为8 ‑10℃， 处理功率为280 ‑320W， 处理时间为6 ‑8min， 低温等离子处理结束后得到 初级冻干保护剂， 将初级冻干保护剂、 海藻糖、 枸杞多糖混合后置于球磨 机中进行第二次球 磨， 控制第二次球磨时的球料比为15 ‑18:1， 转速为350 ‑400rpm， 第二次球磨时间为50 ‑ 55min， 第二次球磨结束后得到冻干保护剂； 所述冻干保护剂的制 备中， 蔗糖、 麦芽糊精、 谷氨酸钠、 氯化钠的重量比为6 ‑8:3‑4:1‑ 3:0.1‑0.4； 所述冻干保护剂的制备中， 初级冻干保护剂、 海藻糖、 枸杞多糖的重量比为40 ‑45:2‑3: 3‑5；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114712406 A 2所述分散剂的制备方法为： 将柠檬酸钠、 低聚半乳糖、 硬脂酰乳酸钙混合后置于球磨机 中进行球磨， 控制球磨时的球料比为10 ‑12:1， 转速为300 ‑350rpm， 球磨时间为45 ‑50min， 球 磨结束后进行紫外照射， 控制紫外照射中紫外线的波长为250 ‑280nm， 紫外照射的时间为 35‑40min， 紫外照射结束得到分散剂； 所述分散剂的制备中， 柠檬酸钠、 低聚半乳糖、 硬脂酰乳酸钙的重量比为20 ‑24:3‑4:1‑ 2； 所述表面活性剂的制备方法为： 将甜菜碱、 单甘酯、 柠檬酸、 卡拉胶混合后置于球磨机 中进行球磨， 控制球磨时的球料比为12 ‑15:1， 转速为350 ‑400rpm， 球磨时间为40 ‑45min， 球 磨结束后得到表面活性剂； 所述表面活性剂的制备中， 甜菜碱、 单甘酯、 柠檬酸、 卡拉胶的重量比为7 ‑10:3‑5:4‑6: 1‑3； 所述改性因子的制备方法为： 将微晶纤维素、 山梨糖醇、 环糊精混合均匀后置于温度为 40‑45℃， 湿度为85 ‑90%的环境下静置40 ‑45min， 然后进行真空冷冻 干燥， 控制真空冷冻 干 燥处理的温度为 ‑40℃至‑35℃， 真空度为100 ‑120Pa， 处理时间为1 ‑1.2h， 真空冷冻 干燥结 束得到初级改性因子， 然后将对初级改性因子进行低 温等离子体照射， 控制低 温等离子体 照射中的作用气氛为氮气， 电压为30 ‑40kV， 照射时间为30 ‑35min， 低温等离子体照射结束 得到改性因子； 所述改性因子的制备中， 微晶纤维素、 山梨 糖醇、 环糊精的重量比为25 ‑30:7‑9:2‑4。 2.根据权利要求1所述的具有预防皮肤衰老功能的益生菌群组合物， 其特征在于， 所述 制备种子液的方法中的液体培养基， 由以下成分组成： 3 ‑5g/L葡萄糖， 2 ‑3g/L胰蛋白胨， 0.3‑0.5g/L磷酸氢二钠， 0.2 ‑0.5g/L磷酸 二氢钠， 剩余 为去离子水。 3.根据权利要求1所述的具有预防皮肤衰老功能的益生菌群组合物， 其特征在于， 所述 具有预防皮肤衰老功能的益生菌群组合物的制备方法， 具体为： 将混合菌粉、 冻干保护剂、 分散剂、 表面活性剂、 改性因子混合后进行机械振荡， 控制机械振动中的频率为200 ‑ 250rpm， 时间为15 ‑20min， 机械振 荡结束后进行真空冷冻干燥， 控制真空冷冻干燥处理的温 度为‑40℃至‑35℃， 真空度为800 ‑900Pa， 处理时间为35 ‑40min， 真空冷冻干燥结束得到预 防皮肤衰老功能的益 生菌群组合物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114712406 A 3