(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210641024.X (22)申请日 2022.06.07 (71)申请人 中国海洋大学 地址 266003 山东省青岛市崂山区松岭路 238号中国海 洋大学崂山校区 (72)发明人 公丕民　姜静雅　张兰威　高文祥　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 田立媛 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/04(2006.01) C12N 1/02(2006.01) C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称 一种利用天然低共熔溶剂制备高活性乳酸 菌发酵剂的方法 (57)摘要 本发明公开了一种利用天然低共熔溶剂制 备高活性乳酸菌发酵剂的方法， 属于乳酸菌制剂 技术领域。 本发 明公开的一种利用天然低共 熔溶 剂制备高活性乳酸菌发酵剂的方法， 利用乳酸菌 新型甘油 ‑甜菜碱天然低共熔溶剂作为保护剂， 相对于甘油 和甜菜碱作为保护剂， 使用该保护剂 处理后乳酸菌喷雾 干燥存活率 提高了3倍以上。 权利要求书1页 说明书2页 CN 114806972 A 2022.07.29 CN 114806972 A 1.一种利用天然低共熔溶剂制备高活性乳酸菌发酵剂的方法， 其特征在于， 具体步骤 如下： (1)将乳酸菌在培 养基中培 养至对数末期、 稳定前期； (2)离心收集菌体， 采用生理盐水或者0.01M的磷酸盐缓冲液冲洗菌体2次； 再次离心， 收集菌体， 获得菌泥； (3)摩尔比为1： 2的甜菜碱和甘油于旋转蒸发瓶中， 75～85℃下旋转蒸发1～4h至澄清 透明， 制成NADES； (4)以30％(w/v)麦芽糊精为干燥基质， 添加1～15％(w/v)的NADES， 充分混匀后与菌泥 按照2～10： 1的质量比混合， 喷雾 干燥制成菌粉。 2.根据权利要求1所述的一种利用天然低共熔溶剂制备高活性乳酸菌发酵剂的方法， 其特征在于， 步骤(2)所述离心为 4℃， 6000r/min离心10mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114806972 A 2一种利用天然低 共熔溶剂制备高活性乳酸菌发酵剂的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及乳酸菌制剂技术领域， 更具体的说是涉及一种利用天然低共熔溶剂制 备高活性乳酸菌发酵剂的方法。 背景技术 [0002]乳酸菌是食品发酵工业和功能性食品行业中的重要组成部分。 目前， 乳酸菌制剂 主要通过冷冻干燥技术制备， 其存活率较高， 但也存在不能连续生产、 设备造价高、 高能耗 及生产周期长等缺点； 成为限制 乳酸菌干燥制剂发展的重要因素。 喷雾干燥技术具备低成 本、 高效、 可连续等优点， 生产成本仅为冷冻干燥技术的18％， 有望替代冷冻干燥生产乳酸 菌制剂。 但喷雾干燥过程中菌体与热空气接触会引起细胞损伤， 导致干燥后乳酸菌大量死 亡、 活力大幅下降。 [0003]目前， 如何降低干燥引起的乳酸菌死亡、 活性降低是制备高活性乳酸菌发酵剂、 乳 酸菌菌粉以及益生菌菌粉的主要技术难点， 虽然加入甘油、 甜菜碱等保护剂可以提高冷冻 干燥及喷雾干燥后乳酸菌存活率， 但两者效果并不能满足生产需求， 因此对现有保护剂进 行处理， 提高其对乳酸菌喷雾 干燥保护效率是本技 术要解决的主 要问题。 [0004]天然低共熔溶剂(NADES)具有较高的生物相容性、 生物降解性和安全性， 而且制作 过程简单， 成本低。 NADES具有较高的玻璃化温度和极性， 可以通过氢键作用在细胞表面 吸 附排列和进入细胞， 降低菌体在干燥保藏期间细胞结构的破坏和酶失活。 甘油、 甜菜碱等保 护剂是乳酸菌冷冻干燥及喷雾干燥中常用的保护剂， 但制成天然低共熔溶剂使用， 目前并 尚未见报道。 [0005]因此， 提供一种利用天然低共熔溶剂制备高活性乳酸菌发酵剂的方法是本领域技 术人员亟需解决的问题。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本发明提供了一种利用天然低共熔溶剂制备高活性乳酸菌发酵剂的方 法， 主要用于制备益 生菌菌粉、 乳酸菌制剂、 乳酸菌 菌粉生产中。 [0007]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0008]一种利用天然低共熔溶剂(NADES)制备高活性乳酸菌发酵剂的方法， 具体步骤如 下： [0009](1)将乳酸菌在培 养基中培 养至对数末期、 稳定前期； [0010](2)离心收集菌体， 采用生 理盐水或者0.0 1M的磷酸盐缓冲液冲洗菌体2次； 再次离 心， 收集菌体， 获得菌泥； [0011](3)摩尔比为1： 2的甜菜碱和甘油于旋转蒸发瓶中， 75～85℃下旋转蒸发1～4h至 澄清透明， 制成NADES； [0012](4)以30％(w/v)麦芽糊精为干燥基质， 添加1～15％(w/v)的NADES， 充分混匀后与 菌泥按照2～10： 1的质量比混合， 喷雾 干燥制成菌粉。说　明　书 1/2 页 3 CN 114806972 A 3