(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210875635.0 (22)申请日 2022.07.25 (71)申请人 华南理工大 学 地址 510640 广东省广州市天河区五山路 381号 申请人 华南协同创新研究院 (72)发明人 程建华　韩帅鹏　华涛　蓝秀权　 周心慧　 (74)专利代理 机构 广州市华学知识产权代理有 限公司 4 4245 专利代理师 宫爱鹏 (51)Int.Cl. C12P 1/04(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/245(2006.01)C12R 1/25(2006.01) (54)发明名称 一种利用微生物发酵提取茶粕中茶皂素的 方法 (57)摘要 本发明属于生物发酵领域， 公开了一种利用 微生物发酵提取油茶粕中茶皂素的方法， 包括如 下步骤： (1)将粉碎后的油茶粕与氮源、 碳源、 无 机盐和水混合均匀， 经灭菌， 制得发酵培养基； ( 2 ) 在 发 酵 培 养 基 中 接 入 植 物 乳 杆 菌 (Lactobacillus  plantarum)和干酪乳杆菌 (Lactobacillus  casei)， 进行混菌液态发酵， 得 到发酵原液； (3)将发酵原液进行离心过滤得到 澄清茶皂素发酵液， 之后经过提纯得到茶皂素。 本发明只需一次接种液态发酵， 工艺简单可控， 易操作， 可实现工业化生产， 且生产过程绿色环 保； 所得产品纯度高， 提取率高。 权利要求书1页 说明书10页 附图3页 CN 115029385 A 2022.09.09 CN 115029385 A 1.一种利用微 生物发酵提取茶粕中茶皂素的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)将粉碎后的油茶粕与氮源、 碳源、 无机盐和水混合均匀， 经灭菌， 制得发酵培 养基； (2)在发酵培养基中接入植物乳杆菌(Lactobacillus  plantarum)和干酪乳杆菌 (Lactobaci llus casei)， 进行混菌发酵， 得到茶粕发酵原液； (3)将发酵原液进行离心过滤得到澄清高浓度茶皂素发酵液， 之后经过提纯得到茶皂 素。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述发酵培养基的组分为： 油茶粕8～ 12wt％、 氮源0.2 ～1.5wt％、 碳源0.5～3wt％、 无机盐0.1～0.5wt％， 余 量为水。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述氮源为大豆蛋白胨、 胰蛋白胨、 硫酸铵 中的一种或多种， 添加量 为0.5±0.1wt％； 所述碳源为葡萄糖、 蔗糖、 麦 芽糖、 果葡糖浆中的一种或多种， 添加量 为1.0±0.2wt％； 无机盐为K2HPO4、 KH2PO4、 MgSO4一种或多种， 添加量 为0.2±0.05wt％。 4.根据权利要求1或2或3所述的方法， 其特 征在于， 所述油茶粕粉碎至 60～80目。 5.根据权利要求 4所述的方法， 其特 征在于， 所述油茶粕为10 ±0.5wt％。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述发酵温度30～42℃， 发酵时间24～ 72h。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述植物乳杆菌、 干酪乳杆菌的接种量为 0.5％～3％， 植物乳杆菌的菌种浓度为107～1010CFU/mL， 干酪乳杆菌的菌种浓度为107～ 1010CFU/mL。 8.根据权利要求1或2或3所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)所述离心的转速为4000～ 8000r/min， 离心时间为5～15mi n， 并经0.45 μm水系膜过 滤得澄清发酵 液。 9.根据权利要求1或2或3所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)所述提纯将发酵液与水饱 和正丁醇混合后静置5～12h， 萃 取结束后， 将萃取剂进 行真空旋蒸回收正丁醇， 将旋蒸后的 剩余液体进行真空干燥。 10.根据权利 要求1或2或3所述的方法， 其特征在于， 所述真空旋蒸的温度为40～70℃， 转速为60～120r/min， 保持20～40min； 所述真空干燥的温度为60～80℃干燥的时间为6～ 12h。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115029385 A 2一种利用微生物发酵提取茶粕中茶皂素的方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物发酵领域， 具体涉及一种利用微生物发酵提取茶粕中茶皂素的方 法。 背景技术 [0002]油茶为世界4大木本油料作物， 我国油茶种植总规模已达446.67万公顷。 油茶籽榨 油后会产生大量的油茶饼粕， 油茶粕中含有茶皂素、 多糖、 蛋白、 多酚 等多种有效成分。 [0003]茶皂素是一种五环三萜类皂苷， 是由皂苷元(即配基)、 糖体和有机酸形成的结构 复杂的混合物。 从茶皂 素中一共分离出7种皂苷配基。 茶皂 素最早是由日本学者青山新次郎 于1931年从茶树种子中分离出来的。 提纯后的茶皂素为乳白色或淡黄色固体无定形粉末， 具有吸湿性， 味苦辛辣， 有刺激鼻粘膜的特性。 在乳化、 分散、 湿润、 发泡、 稳泡、 去污等方面 具有良好的活性， 是一种天然表面活性剂。 茶皂素不仅具有表面活性， 而且具有生物活性。 在抗菌杀菌、 抗渗透和消炎、 祛痰止咳、 解酒等多方面功效显著。 所以茶皂素具有广泛的用 途。 日用化工上可用作洗发、 洗浴剂； 建材工业上可作起泡稳泡剂； 农业上可用于防治病虫 害的生物农药； 养殖上可用作清池剂， 清除虾池中的敌害鱼类， 还可对钉螺的成螺、 幼螺和 螺卵进行浸杀等 等。 [0004]油茶粕中含有10 ‑15％的天然非离子型表面活性剂茶皂素。 为减少有机溶剂的使 用、 提高茶皂 素的安全性和保护环境， 目前茶皂 素的提取工艺以水提法为主， 微生物发酵法 提取茶皂素 的研究鲜有报道。 然而， 现有技术的水提法和 微生物提取法面临茶皂素 的提取 率和纯度较低的问题。 [0005]CN10435752 7A公开了一种利用大型食用菌固态发酵提取茶皂素的方法。 该方法以 茶粕为主要培养基质， 配以麸皮等辅料， 接种微生物， 进行固态发酵， 实现茶皂素的高效渗 出， 对渗出后的茶皂素通过乙醇浸提后再通过膜分离得到茶皂素产品。 CN101880307A公开 了一种利用黑 曲霉菌、 产黄纤维单胞菌、 酵母菌和枯草芽孢杆菌一次进行发酵从茶粕中提 取茶皂素 的方法， 该方法以粉碎的干茶籽粕为原料、 以水为溶剂、 加入适量的生长因子， 并 以依序加入的黑曲霉菌、 产黄纤维单胞菌、 酵母菌和枯草芽孢杆菌为 发酵媒介， 经多次发酵 处理制得茶皂素粗提液， 最终用大孔树脂法将其纯化， 获得茶皂素产品。 CN101880307A公开 了一种利用外源添加的高淀粉类物质与复合酶、 酒精酵母混合发酵提取茶皂素 的方法。 使 外源高淀粉类物质中的淀粉充分被酒精酵母利用产生酒精， 形成醪液， 然后将一定量的粉 碎好的油茶饼粕粉浸泡到发酵好的醪液中混匀培养， 几天后， 进 行固液分离， 再对分离所得 液体的上层清夜进行浓 缩干燥得到最终产物茶皂素。 [0006]现有技术主要以茶粕固态发酵、 多菌种多次液态发酵、 或者以水提液和酶解液为 底物进行发酵为主， 得到发酵液通过大孔树脂吸 附、 膜分离或直接将发酵液干燥的方法提 取茶皂素产品。 固态发酵所需的大型真菌时间需要5～10天， 周期较长， 并且堆叠在内部的 茶粕不能得到充分分解， 膜分离的效率过低不适于工业化生产。 多菌种多次发酵要面临多 次的灭菌和接种过程， 工艺繁琐， 且分离过程采用大孔树脂吸附乙醇脱洗， 其效率大大降低说　明　书 1/10 页 3 CN 115029385 A 3