(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211088257.8 (22)申请日 2022.09.07 (71)申请人 曲阜师范大学 地址 273165 山东省济宁市曲阜市 静轩西 路57号 (72)发明人 赵峰　董梅　 (74)专利代理 机构 济南泉城专利商标事务所 37218 专利代理师 王翠翠 (51)Int.Cl. C12P 19/44(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/385(2006.01) (54)发明名称 一种利用花生枯饼固态发酵制备鼠李糖脂 的方法 (57)摘要 本发明提供一种利用花生枯饼固态发酵制 备鼠李糖脂的方法。 该方法以花生枯饼为营养底 物， 添加适量的秸秆支撑物、 无机盐和水制成固 体培养基； 将铜绿假单胞菌（ Pseudomonas   aeruginosa ） 菌种的种子液接种到 上述固体培养 基， 在一定温度下进行固态发酵生产鼠李糖脂。 发酵结束后， 利用溶剂浸提固态发酵培养物， 调 节浸出液pH， 经低温静置、 离心等过程得到鼠李 糖脂。 本发 明利用花生榨油后的残渣花生枯饼为 原料， 经固态发酵生产鼠李糖脂， 既实现花生油 生产加工副产品的髙值资源化利用， 降低鼠李糖 脂的生产成本， 又达到无泡沫发酵生产鼠李糖脂 生物表面活性剂的效果。 权利要求书1页 说明书5页 CN 115369138 A 2022.11.22 CN 115369138 A 1.一种利用花生枯饼固态发酵制备鼠李糖脂的方法， 其特征在于， 以花生榨油后的残 渣 （花生枯饼） 为营养底物、 以秸秆为支撑物制备固体发酵培养基， 利用保藏编号为CGMCC   NO.21276的铜绿假单胞菌 （ Pseudomonas  aeruginosa ） 为发酵菌种， 通过固态发酵生产鼠李 糖脂。 2.根据权利要求1所述的一种利用花生枯饼固态发酵制备鼠李糖脂的方法， 其特征在 于， 包括以下步骤： 1） 固体培养基制备： 固体培养基由花生枯饼、 秸秆、 无机盐水溶液混合搅拌而成， 并在 115℃灭菌 30min； 2） 发酵菌种种子液制备： 液体种子培养基在115℃灭菌30min， 冷却后， 将铜绿假单胞菌 CGMCC NO.21276菌种接种至液体种子培养基中， 接种量为2%~10% （v/v） ， 制备发酵菌种的种 子液； 3） 固态发酵： 将铜绿假单胞菌CGMCC  NO.21276的种子液接种到花生枯饼固体培养基， 固态发酵生产鼠李糖脂； 接种量为2%~10% （L/100kg固体培养基） ， 发酵时间5~8天， 发酵温度 为30℃~40℃； 4） 鼠李糖脂的提取： 利用氢氧化钠调节蒸馏水的pH至8.0~9.0， 然后用作溶剂去浸提 固 态发酵培养物20~30min， 离心收集浸 出液， 利用盐酸调节浸出液pH至1.5~2.0， 经低温静置、 离心、 干燥得到鼠李糖脂 。 3.根据权利要求  2所述的一种利用花生枯饼固态发酵制备鼠李糖脂的方法， 其特征在 于， 固体培养基中花生枯饼、 秸秆和无机盐水溶液的比例为2~6kg:0.1~0.5kg:1~3L； 秸秆为 小麦秸秆或水稻秸秆； 无机盐水溶液组成为硝酸钠6g/L， 磷酸二氢钾6g/L， 磷酸氢二钾 7.5g/L， 七水硫酸镁1.2g/L， 氯化钙0.1g/L， 余 量为水。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115369138 A 2一种利用花生枯饼固态发酵制备鼠李糖脂的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 生物技术领域， 具体为一种利用花生枯饼固态发酵制备鼠李糖脂的方 法。 背景技术 [0002]鼠李糖脂是一类主要由铜绿假单胞菌 （ Pseudomonas  aeruginosa ） 合成的糖脂类 生物表面活性剂 。 与化学合 成的表面活性剂相比， 鼠李糖脂具有高活性、 无毒、 易降解、 生态 友好、 可以在极端环境中保持活性等优势。 随着公众环保意识增强和科技进步， 对生物表 面 活性剂的需求也势必增加。 因其相对较好的活性， 鼠李糖脂已成为当前研究和应用最热门 的生物表面活性剂， 在石油工业、 环 境修复、 农业、 食品、 医药等领域有着广阔应用前景和巨 大应用潜力。 然而， 与化学表 面活性剂相比， 较高的原料成本和工艺投入导致鼠李糖脂的生 产成本较高， 严重影响鼠李糖脂生物 表面活性剂的大规模推广应用。 [0003]目前鼠李糖脂主要通过好氧液态发酵生产获得， 液态发酵生产过程中通气、 搅拌 使得已产生的鼠李糖脂以液膜包裹气体产生泡沫， 并且随着发酵液中鼠李糖脂浓度的增加 而加剧泡沫逃液。 泡沫的产生增加发酵染菌概率和鼠李糖脂产物损失， 严重影响鼠李糖脂 的生产效率。 此外， 鼠李糖脂液态发酵过程的泡沫控制等工艺进一步增加了鼠李糖脂的生 产成本。 鼠李糖脂生产的经济性是其商业化生产应用的瓶颈。 鼠李糖脂的固态发酵生产可 以大大降低的泡沫产生， 是一项值得深入研究和探索的鼠李糖脂发酵生产技术。 合适的固 态营养基质是左右鼠李糖脂固态发酵生产效率的重要因素之一。 [0004]花生仁榨油后约产生一半甚至三分之二的残渣， 即花生枯饼。 花生枯饼中含有丰 富的营养物质， 如 多糖、 蛋白质、 油脂等， 可作为微生物 生长代谢的碳源和氮源。 目前花生枯 饼主要用作动物饲料， 限制了花生枯饼的髙值转化利用， 造成资源的极大浪费。 花生枯饼有 望成为鼠李糖脂固态发酵生产工艺中廉价 易得、 性能优良的固态营养基质。 [0005]利用花生枯饼固态发酵生产鼠李糖脂， 既可以实现花生油生产加工副产品的髙值 资源化利用， 又能达 到无泡沫发酵生产鼠李糖脂的效果， 并能降低鼠李糖脂的生产成本 。 发明内容 [0006]为了克服上述现有技术的不足， 本发明提供了一种利用花生枯饼固态发酵制备鼠 李糖脂的方法。 [0007]为实现上述目的， 本发明采用技 术方案为： 一种利用花生枯饼固态发酵制 备鼠李糖脂 的方法， 以花生榨油后的残渣 （花生枯 饼） 为营养底物、 以秸秆为支撑物制备固体发酵培养基， 利用保藏编号为CGMCC  NO.21276的 铜绿假单 胞菌 （Pseudomo nas aeruginosa） 通过固态发酵生产鼠李糖脂 。 [0008]上述方法中固体培养基由花生枯饼、 秸秆、 无机盐水溶液混合搅拌而成， 花生枯饼 为花生榨油后的残渣， 秸秆为小麦秸秆或水稻秸秆， 无机盐包括硝酸钠， 磷酸二氢钾， 磷酸 氢二钾， 七水硫酸镁， 氯化钙。说　明　书 1/5 页 3 CN 115369138 A 3